Предимплантационная диагностика эмбрионов


Преимплантационная генетическая диагностика — Википедия

Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) — диагностика генетических заболеваний у эмбриона человека перед имплантацией в слизистую оболочку матки, то есть до начала беременности. Обычно для анализа проводится биопсия одного бластомера у эмбриона, находящегося на стадии дробления (4-10 бластомеров). При материнском носительстве генетической патологии возможна биопсия 1-го и 2-го полярных телец яйцеклетки до оплодотворения. В последние годы наблюдается тенденция к переходу на биопсию трофэктодермы (внешнего слоя клеток) на стадии бластоцисты (пятый день развития эмбриона)[1]. Преимплантационная генетическая диагностика рассматривается в качестве способа альтернативного пренатальной диагностике. Его главное преимущество заключается в том, что при его использовании отсутствует селективное прерывание беременности, а вероятность рождения ребёнка без диагностируемого генетического заболевания достаточно высока. Таким образом, ПГД является дополнительной процедурой к вспомогательным репродуктивным технологиям и требует экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Идея проведения преимплантационной генетической диагностики появилась ещё до рождения первого ЭКО-ребёнка. В 1967 году была опубликована статья Р.Эдвардса (R. G. Edwards) и Р. Гарднера (R. L. Gardner) о проведении биопсии эмбрионов кролика для определения пола до имплантации, в которой авторы предсказывали появление аналогичных технологий у человека[2]. Однако преимплантационная генетическая диагностика у человека стала возможной лишь в начале 90-х годов, когда был достигнут достаточный технологический уровень экстракорпорального оплодотворения, а также разработана полимеразная цепная реакция, позволяющая проведение анализа ДНК в единичных клетках.

В 1989 году проведена первая успешная попытка определения пола при помощи ПЦР-анализа бластомера, взятого у эмбриона на стадии дробления (6-8 бластомеров)[3]. Первые успешные роды после подобной процедуры у супружеских пар с риском по рецессивному Х-сцепленному заболеванию состоялись в 1990 году[4].

В 1990 году произведена диагностика моногенного заболевания до оплодотворения, методика включала ПЦР-анализ полярных телец яйцеклетки[5].

Первое рождение ребёнка после преимплантационной ПЦР-диагностики моногенного заболевания (муковисцидоза) состоялось в 1992 году[6].

В дальнейшем для определения пола эмбриона, а также хромосомных аномалий стали использовать метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Начиная с 2012 года, метод FISH для определения хромосомных аномалий постепенно вытесняется методом сравнительной геномной гибридизации. Метод ПЦР остался незаменимым для диагностики моногенных заболеваний.

Показания для проведения преимплантационной диагностики[править | править код]

Преимплантационная генетическая диагностика показана супружеским парам, у которых имеется носительство хромосомной перестройки или моногенного заболевания. Примерами моногенных заболеваний могут служить муковисцидоз, болезнь Тея — Сакса, серповидноклеточная анемия, гемофилия А, миодистрофия Дюшена и многие другие.

Кроме этого, преимплантационная генетическая диагностика проводится у супружеских пар с повышенным риском врождённых аномалий у детей, который не связан с носительством диагностированных мутаций. К таким случаям относятся пары, где возраст матери превышает 35 лет; где возраст отца выше 39 лет; если у отца наблюдаются тяжёлые нарушения сперматогенеза; у супружеских пар с привычным невынашиванием; у супружеских пар с повторяющимися неудачными попытками ЭКО.

В случае неопределённого повышенного риска рождения ребёнка с врождёнными аномалиями преимплантационная генетическая диагностика проводится для девяти хромосом, с которыми связаны наиболее часто встречающиеся врождённые заболевания. Это хромосома 13 (синдром Патау), хромосома 15 (синдром Прадера-Вилли), хромосома 16, хромосома 17, хромосома 18 (синдром Эдвардса), хромосома 21 (синдром Дауна), хромосома 22 (синдром «кошачьих зрачков»), а также половые хромосомы X и Y (различные численные аномалии, включая синдром Шерешевского — Тернера и синдром Кляйнфельтера).

Преимплантационную генетическую диагностику проводят в некоторых случаях, не связанных с возможной генетической патологией плода, целью такой диагностики является рождение ребёнка с определёнными генетическими характеристиками. К таким случаям относится, например, преимплантационная генетическая диагностика, проводимая для предотвращения резус-конфликта.

Существуют случаи, когда комбинируются несколько предпосылок к преимплантационной генетической диагностике. Одним из таких примеров является случай, когда при помощи преимплантационной генетической диагностики был рождён HLA-совместимый донор для клеточной терапии анемии Фанкони у пробанда[7]. В данном случае была исключена анемия Фанкони и был подобран нужный тип гистосовместимости.

Проведение преимплантационной диагностики возможно только в рамках лечебного цикла ЭКО, а точнее экстракорпоральное оплодотворение с интраплазматической инъекцией сперматозоидов (ИКСИ), то есть сперматозоид вводят в яйцеклетку «вручную» с помощью микрохирургических инструментов. Процедура ИКСИ необходима в связи с тем, что при обычном ЭКО к яйцеклетке добавляется большое количество сперматозоидов. Затем, при заборе полярных телец или бластомеров, есть риск попадания в анализ вместе с клеткой эмбриона генетического материала сперматозоида, не участвовавшего в оплодотворении.

Подготовка к лечебному циклу и сам лечебный цикл ЭКО с ПГД практически не отличается от обычного лечебного цикла ЭКО:

  1. женщина получает гормональные препараты для стимуляции суперовуляции;
  2. производится трансвагинальная пункция фолликулов;
  3. оплодотворение яйцеклеток сперматозоидами проводится в условиях эмбриологической лаборатории;
  4. перенос эмбрионов в матку проводится на 5-6 сутки.
Созревание яйцеклетки

Если генетическое нарушение наследуется от женщины, то можно отобрать «здоровые» эмбрионы, пройдя процедуру тестирования только полярных телец, не трогая сам эмбрион. Также можно протестировать только бластомеры. Либо может проводиться последовательное изучение полярных телец, затем бластомеров.

Какая именно схема ПГД будет применяться для каждого конкретного случая, определяется на консультации с врачом-генетиком либо специально подготовленным ПГД-консультантом при планировании ПГД.

При первом делении мейоза ооцит 1-го порядка делится, в результате чего образуются ооцит 2-го порядка и небольшое первое редукционное тельце (обе клетки с гаплоидным набором хромосом). При втором делении мейоза в результате деления ооцита 2-го порядка образуются одна яйцеклетка и второе редукционное тельце. Первое редукционное тельце иногда тоже делится на две одинаковые мелкие клетки. В результате этих преобразований ооцита 1-го порядка образуются одна яйцеклетка и три редукционных тельца, где и яйцеклетка, и редукционные тельца имеют гаплоидный набор хромосом. Таким образом, можно исследовать полярные тельца, чтобы установить унаследовала ли яйцеклетка генетический дефект.

После оплодотворения яйцеклеток сперматозоидами в условиях эмбриологической лаборатории эмбрион развивается — клетки делятся. На третий день эмбрион состоит из 6-8 бластомеров. И на третий день происходит забор биологического материала для генетического исследования — так называемая «биопсия эмбрионов», то есть извлечение из эмбриона одного бластомера (а иногда также и полярных телец) с помощью специальных микроинструментов. Процедура не нарушает дальнейшего развития эмбриона. В то время пока выполняется генетическая диагностика, эмбрионы продолжают развиваться в соответствующей культуральной среде до переноса в полость матки на 5-е сутки развития. К этому времени эмбрион должен достичь стадии бластоцисты.

Перед переносом эмбриолог оценивает строение и форму эмбрионов. Результат генетической диагностики сопоставляется с морфологией эмбрионов и делается заключение о том, какие эмбрионы рекомендуются для переноса в матку. Для переноса отбирают самые лучшие по морфологическим характеристикам эмбрионы без генетических нарушений.

Анализ проводится в очень сжатые сроки. Для анализа бластомеров доступно всего 2 суток, так как эмбрион не может продолжать своё развитие вне организма матери далее стадии бластоцисты (5-е сутки после оплодотворения), поэтому исследование обязательно должно быть выполнено за это короткое время.

Альтернативным подходом является проведение ПГД в криоцикле. В таком случае биопсия производится на 5 день развития, и сразу после неё эмбрионы подвергаются криоконсервации. В последующий месяц проводится генетическая диагностика и рекомендованные эмбрионы без мутаций переносятся в матку при следующем цикле. Практика разобщённого цикла имеет ряд преимуществ: меньший риск гиперстимуляции, большее количество материала и времени для анализа, менее травматичная для эмбриона процедура биопсии. Недостатком криоцикла является большее время от начала стимуляции до переноса эмбриона[1].

  1. Для числовых и структурных хромосомных нарушений применяется метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ). Обычно проводится для анализа числовых нарушений трёх, пяти или семи хромосом, чаще всего хромосом 13, 18, 21, X и Y.
  2. Современной альтернативой методу FISH является метод сравнительной геномной гибридизации на микрочипах (СГС). СГС позволяет протестировать все хромосомы одновременно.
  3. При проведении ПГД моногенных заболеваний применяется метод ПЦР.

Метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) — метод цитогенетического анализа, используемый для выявления и локализации специфических последовательностей ДНК на метафазных хромосомах и в интерфазных ядрах. В этом методе используются ДНК-зонды, которые представляют собой нуклеотидную последовательность ограниченного размера, комплементарную определённому участку ядерной ДНК. Зонд несёт «метку», то есть содержит нуклеотиды, связанные с флуорофором (молекулу, способную к флуоресценции). После процедуры гибридизации в случае образования гибридной молекулы ДНК-зонда и ДНК мишени на исследуемом цитогенетическом препарате можно наблюдать свечение специфических последовательностей ДНК на хромосомах или в ядрах при помощи флуоресцентного микроскопа.

Полимеразная цепная реакция — это метод, основанный на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Преимущества преимплантационной диагностики[править | править код]

  • Выбор и перенос в матку только тех эмбрионов, которые не имеют хромосомных патологий
  • Снижение риска рождения ребёнка с определёнными генетическими дефектами
  • Снижение риска невынашивания (примерно в 2 раза)
  • Снижение риска многоплодия (примерно в 2 раза)
  • Увеличение шанса на успешную имплантацию (примерно на 10 %)
  • Увеличение шансов на благополучное рождение ребёнка (примерно на 15-20 %).

Риск при проведении преимплантационной диагностики[править | править код]

  • Риск случайного повреждения эмбриона (<1 %)
  • Ошибочная диагностика (до 10 %)
  • 3,5 % вероятности того, что эмбрион с патологией будет диагностирован как нормальный

Возможность диагностики ещё до наступления беременности является главным преимуществом ПГД. Такая диагностика минимизирует риск того, что придется прервать развитие плода по генетическим причинам. Кроме того, в цикле ЭКО-ПГД получают обычно несколько эмбрионов, что позволяет выбрать эмбрион без генетического нарушения. Недостатками ПГД являются необходимость прохождения лечебного цикла ЭКО, достаточно высокая стоимость. Тем не менее, преимущества ПГД и опыт применения в разных клиниках во всем мире доказывают эффективность этой технологии. На сегодняшний день ПГД предоставляет пациентам с наследственной патологией альтернативный способ снизить риск беременности больным плодом и рождения ребёнка с генетическим заболеванием. Необходимо учитывать, что ПГД не может являться полной заменой пренатальной диагностики. В связи с тяжестью наследственной патологии, которая проверяется при ПГД и пренатальной диагностике, необходимо применить все методы исследования и подтверждающей диагностики, чтобы исключить генетический дефект.

ru.wikipedia.org

Предимплантационная генетическая диагностика в Москве

Применение преимплантационной генетической диагностики возможно исключительно в рамках программы ЭКО, и в свое время стало настоящим прорывом в области вспомогательных репродуктивных технологий. Возможность определять генетические нарушения на стадии доимплантационного развития – шанс значительно повысить эффективность лечения бесплодия и достигнуть главной цели – рождения здорового малыша в семье.

Показания к ПГД

Преимплантационная генетическая диагностика рекомендуется в случае диагностированных генетический нарушений у одного или обоих будущих родителей. Если у мужчины и женщины обнаружены нарушения в кариотипе, ПГД является одним из важнейших этапов в алгоритме предупреждения рождения ребенка с патологией и наступления беременности плодом с патологией. В данном случае ПГД предполагает исследование эмбрионов на анеуплоидии хромосом, вовлеченных в транслокации, а также на самые распространенные хромосомные нарушения (синдромы Дауна, Патау, Эдвардса).

Рис.1. Анеуплоидии у эмбриона по хромосомам 15, 20 и 21 у пациентки 40 лет методом NGS.

ПГД назначают при неудачах ЭКО и привычном невынашивании беременности. Как при естественном зачатии, так и в рамках программ ВРТ, основное количество (75-80%) прерываний беременности приходится на I триместр. Причинами невынашивания беременности могут быть как генетические отклонения эмбриона, так и многоплодие. ПГД при невынашивании беременности может помочь уменьшить частоту самопроизвольного прерывания. У пациентов с выкидышами в анамнезе уровень спонтанных абортов удалось снизить до 16.7% против ожидаемых 36.5%, у женщин старше 35 - до 12% против ожидаемых 44.5%.

Рис.2. Биопсия клеток трофэктодермы у эмбриона 5 дня развития.

Преимплантационная генетическая диагностика незаменима и в случае мужского фактора бесплодия, при выявлении высоких показателей генетических нарушений в сперматозоидах. Изучение хромосом в сперматозоидах, полученных от мужчин с олиго/астено/ тератозооспермией (ОАТ), показало повышенный уровень анеуплоидии (неправильный набор хромосом) по сравнению с мужчинами без отклонений в показателях спермограммы. У мужчин с нормальным кариотипом показатель частоты анеуплоидии половых хромосом в сперматозоидах наблюдали при олигоастенотератозооспермии в 4 раза чаще, чем при нормальной спермограмме. Применение для оплодотворения сперматозоидов с патологическим набором хромосом приводит к формированию эмбриона с генетической патологией, а затем, зачастую, к замиранию и невынашиванию беременности, или рождению ребенка с патологией.

Рис.3. Генетическая диагностика у эмбрионов методом КФ-ПЦР.

Репродуктолог рекомендуют проведение ПГД, если возраст женщины превышает 35 лет, так как, к сожалению, существует медицинская статистика, позволяющая говорить, что в позднем репродуктивном периоде повышается риск рождения ребенка с генетической патологией, в том числе с синдромом Дауна и серьезными заболеваниями, пороками развития различных органов и систем.

Показания к проведению ПГД

  • случаи рождения детей с наследственной и врожденной патологией в анамнезе;
  • диагностированные сбалансированные хромосомные аберрации (транслокации и др.) в паре;
  • возраст женщины от 35 лет;
  • 2 и более неудачных попыток ЭКО в анамнезе;
  • замирание и невынашивание беременности в анамнезе, а также случаи пузырного заноса;
  • высокий процент сперматозоидов с генетической патологией у мужчины;
  • каждой семье, которая имеет желание провести ПГД в рамках программы ЭКО, чтобы быть уверенными в здоровье будущего ребенка и повысить шансы на успех лечения.

Рис.4. Уровень наступления беременности в рамках программы ЭКО с проведением генетической диагностики и без.

Возможности ПГД

Преимплантационная генетическая диагностика дает широкие возможности по выявлению генетических нарушений эмбрионов и позволяет осуществлять перенос перспективного, жизнеспособного эмбриона. Преимплантационная диагностика позволяет успешно реализовывать и актуальную тенденцию современной репродуктивной медицины – селективный перенос одного здорового эмбриона и наступление беременности одним плодом, так как многоплодная беременность имеет свои особенности и акушерские риски.

Рис.5. Результаты анализа, полученные с помощью метода CGH и NGS.

Таким образом проведение ПГД достоверно помогает:

  • увеличить частоту наступления беременности;
  • увеличить частоту благополучного вынашивания беременности;
  • снизить частоту наступления многоплодных беременностей;
  • снизить риски рождения ребенка с патологией.

Как и когда проводится ПГД?

Проведение преимплантационной генетической диагностики включает 2 этапа: получение клеток от эмбрионов с помощью специального лазерного оборудования, которое является безопасным для развивающихся эмбрионов; исследование полученного материала в генетической лаборатории.

Забор клеток для ПГД, как правило, проводится на 5-е сутки развития, на стадии бластоцисты. Именно в этот период у эмбриона уже достаточно много клеток, и, соответственно, ДНК для анализа, что позволяет получать более достоверные и надежные результаты диагностики.

mamadeti.ru

ПГД эмбрионов, преимплантационная генетическая диагностика эмбрионов

Каждая из 100 триллионов клеток в организме человека (за исключением красных кровяных клеток) содержит весь человеческий геном. Хромосомы – это струноподобные элементы внутри ядра (в центре) каждой клетки вашего тела. Они содержат генетическую информацию, ДНК. Ген занимает определенное место на хромосоме. В норме, есть 23 идентичных пары хромосом (2 метра ДНК) в каждой клетке, в общей сложности 46 хромосом. Каждый партнер во время оплодотворения обычно предоставляет 23 хромосомы. Если яйцеклетка или сперматозоид имеют аномальную упаковку хромосом, эмбрион, который они создают, также будет иметь хромосомные аномалии. Иногда это связано с перестройкой хромосом, или недостатком части хромосомы. В некоторых случаях есть отсутствующие хромосомы, или дополнительная хромосома (анеуплоидии), ведущие к наследственным заболеваниям. Любой эмбрион, в котором отсутствует хромосома (моносомия) перестанет расти до имплантации (фатальная аномалия). Если анеуплоидии включают хромосомы 13, 18, 21, Х или Y, беременность может дойти до родов. Наиболее распространенной из этих несмертельных аномалий является трисомия 21, или синдром Дауна, при которой присутствует дополнительная 21-я хромосома. Другие включают синдром Тернера у женщин и синдром Клайнфельтера у мужчин.

История преимплантационной генетической диагностики (ПГД)

Первые живорождения после ПГД были зарегистрированы в Лондоне в 1989 году. Две двойни девочек-близнецов родились от пяти пар с риском передачи связанного с Х-хромосомой заболевания. В настоящее время с помощью методов генетического анализа или ПГД могут быть обнаружены около 90% аномальных эмбрионов. Не все хромосомные или генетические заболевания могут быть определены этими процедурами, так как в ходе одной процедуры может быть диагностировано только ограниченное число хромосом. Многочисленные исследования на животных и некоторые исследования на человеке показывают, что микрохирургия эмбриона (биопсия), необходимая для удаления клеток, не влияет на нормальное развитие ребенка. Эта процедура, однако, была выполнена относительно небольшому числу пациентов во всем мире, поэтому точные негативные последствия, если таковые имеются, неизвестны. Несмотря на то, что после генетического анализа для выявления анеуплоидии всем мире на сегодняшний день было рождено уже много детей, эта процедура все еще относительно нова. В исследованиях на животных не было обнаружено никаких очевидных проблем и предварительные данные с эмбрионами человека позволяют предположить справедливость этого вывода. В исследовании, проведенном в Университетском колледже Лондона, исследователи недавно рассмотрели 12 преимплантационных эмбрионов с новой техникой, которая сочетает в себе амплификацию всего генома (WGA) и сравнительную гибридизацию генома (CGH). В результате в 8 из 12 изученных эмбрионов были обнаружены значительные хромосомные аномалии. Это может объяснить, почему люди имеют в лучшем случае 25% шансов на достижение жизнеспособной беременности в месяц при естественном зачатии.

Как передаются по наследству генетические заболевания

В диаграммах ниже, D или d представляет дефектный ген, а N или n представляет нормальный ген. Мутации не всегда приводят к болезни.

Доминантные заболевания:

Один из родителей имеет один дефектный ген, который доминирует над своей нормальной парой. Так как потомки наследуют половину своего генетического материала от каждого из родителей, есть 50% риск наследования дефектного гена, и, следовательно, заболевания.

Рецессивные заболевания:

Оба родителя являются носителями одного дефектного гена, но при этом имеют нормальную пару гена. Для наследования заболевания необходимы две дефектных копии гена. Каждый потомок имеет 50% шанс быть носителем, и 25% шанс унаследовать заболевание.

X-сцепленные заболевания:

Нормальные женщины имеют XX хромосомы, а нормальные мужчины XY. Женщины, которые имеют нормальный ген на одной из Х-хромосом, защищены от дефектного гена на их другой Х-хромосоме. Однако, у мужчины отсутствует такая защита в связи с наличием только одной Х-хромосомы. Каждый мужской потомок от матери, которая несет в себе дефект, имеет 50% шанс унаследовать дефектный ген и заболевание. Каждый женский потомок имеет 50% шанс быть носителем, как и ее мать. (на рисунке ниже X представляет нормальный ген а X представляет дефектный ген)

Возможные преимущества генетического анализа

Преимплантационная генетическая диагностика позволяет отобрать и перенести не измененные (хромосомно нормальные) эмбрионы, которые могут привести к большей частоте имплантации на эмбрион, сокращению потерь беременности и рождению большего числа здоровых детей. Генетическая диагностика предлагает парам альтернативу мучительному выбору по поводу того, чтобы прервать пострадавшую беременность после пренатальной диагностики, производимой путем амниоцентеза или биопсии ворсин хориона (CVS) на более поздних стадиях беременности. Почти все генетически связанные заболевания, которые могут быть диагностированы в перинатальном периоде либо амниоцентезом или CVS, могут быть обнаружены и ПГД. Процедура должна уменьшить психологическую травму для пар, которые несут повышенный риск генетических заболеваний для потомства.

Преимущества преимплантационной генетической диагностики (ПГД) могут включать в себя:

  • Была выдвинута гипотеза, что негативный отбор анеуплоидных эмбрионов позволит улучшить частоту имплантации, из-за корреляции между старшим возрастом матери и хромосомно аномальными эмбрионами. Хромосомно нормальные эмбрионы имеют в перспективе более высокие шансы на развитие. При переносе только хромосомно нормальных эмбрионов в матку, ваши шансы на невынашивание могут уменьшиться, а ваши шансы забеременеть могут увеличиться. Двадцать один процент спонтанных абортов обусловлены численными хромосомными нарушениями, и основным фактором риска является возраст матери. Трисомии увеличиваются с 2% у женщин 25 лет до 19% у женщин старше 40 лет. По данным ASRM-SART, 52% циклов ЭКО в США осуществляется для женщин 35 лет и старше, что показывает, что популяция ЭКО может получить большую пользу от скрининга хромосомных анеуплоидий. Важно отметить, что вероятность наступления беременности и родов здоровым ребенком, однако, снижается у пациентов старше 34 лет (как правило, менее 50%) из-за проблем, связанных с процедурой ЭКО.
  • ПГД в состоянии идентифицировать большинство хромосомных аномалий с риском развития до родов. В настоящее время применяется ПГД хромосомных аномалии для X, Y, 13, 14, 15, 16, 18, 21 и 22 хромосом. Это составляет 70% анеуплоидий, обнаруживаемых при спонтанных абортах.
  • Вполне возможно, что некоторая информация о ваших собственных яйцеклетках и эмбрионах может быть полезной для вас в случае дальнейших попыток ЭКО, или поможет объяснить прошлые неудачи при естественном зачатии или ЭКО.
  • Будущие пациенты могут извлечь выгоду из информации, полученной от ПГД о связи между хромосомами, неразвивающимися или неимплантирующимися эмбрионами.

Возможные риски генетического анализа

  • В лучшем случае, с помощью методов ПГД могут быть обнаружены около 90% от аномальных эмбрионов.
  • Относительно большое число яйцеклеток или эмбрионов могут быть признаны ненормальными и поэтому для переноса останется только несколько эмбрионов. В некоторых случаях (11%), может не быть нормальных яйцеклеток или эмбрионов. В этих случаях перенос эмбриона не рекомендуется. Хотя это и разочаровывающий результат, вполне вероятно, что цикл ЭКО без ПГД не привел бы к беременности или привел бы к аномалиям у плода.
  • Клетки, которые будут удалены, изучаются с помощью специализированных новых методов. Такие процедуры иногда не могут быть проведены из-за технических сложностей.
  • Не все хромосомные или генетические отклонения могут быть определены пир помощи данных методов, так как в ходе одной процедуры может быть диагностировано только ограниченное число хромосом.
  • Вполне возможно, что нормальный эмбрион может быть неправильно определен как ненормальный, и не перенесен, или что аномальный эмбрион неправильно определен как нормальный и будет перенесен в матку. (ПГД в настоящее время не является заменой для пренатальной диагностики. Рекомендуется проведение пренатальной диагностики для подтвердения диагноза).
  • При удалении клеток может случайно произойти повреждение эмбриона (0,1%).
  • Неявные технические обстоятельства в лаборатории могут привести к неудаче процесса тестирования, что приводит к отсутствию результатов. Неудача процесса тестирования не оказывает никакого влияния на ваш эмбрион. В этом случае, эмбрионы для переноса будут отобраны на основе существующих критериев.
  • Анализ одной клетки имеет свои ограничения. Иногда, хромосомные аномалии находятся в одной клетке, но не в других клетках того же эмбриона, или наоборот, что выражается мозаицизмом. Это может привести к переносу аномального эмбриона, или к отказу от нормального эмбриона.
  • ПГД для определения транслокаций может определить наличие или отсутствие определенных хромосомных нарушений, но не может ни определить генетическое заболевание, ни предсказать генетические уродства.
  • Даже после успешной процедуры ПГД беременность может не наступить.

Кандидаты для биопсии эмбриона и ПГД

Кандидаты для биопсии эмбриона и ПГД включают в себя:

  • Женщины старше 34 лет: женщины рождаются со всеми яйцеклетками, которые они будут когда-нибудь иметь, и по мере старения женщины ее яйцеклетки подвергаются также воздействию этого процесса старения. Таким образом, вероятность зачатия хромосомно аномального потомство с возрастом увеличивается. В целом риск анеуплоидии увеличивается с 1 на 385 в возрасте 30 лет, до 1 на 179 в возрасте 35 лет, до 1 на 63 в возрасте 40 лет, и в возрасте до 45 лет возможность рождения больного ребенка составляет 1 к 19. В результате использования ПГД при ЭКО стало известно, что в действительности больее чем 20% эмбрионов у женщин в возрасте от 35 до 39 анеуплоидны, и страдают почти 40% эмбрионов у женщин старше 40 лет. Большинство из этих эмбрионов в случае переноса в матку либо не имплантируются или приводят к невынашиванию. Это считается основной причиной низкой частоты наступления беременности и родов женщин в возрасте 40 лет и старше. До внедрения ПГД, для увеличения шансов на зачатие в матку переносилось большее число эмбрионов. По-прежнему настоятельно рекомендуется проведение пренатальной диагностики после цикла ЭКО, поскольку это подтверждает прогноз нормального потомства. Возможно также, что аномальные эмбрионы могут быть ошибочно определены как нормальные и перенесены в матку.
  • Женщины с рецидивирующей потерей беременности (привычным невынашиванием): мужчина или женщина пары может иметь ненормальную упаковку хромосом, что может вызвать фатальные аномалии в некоторых беременностях, но не в других.
  • Пары с транслокациями: транслокации – это изменения в конфигурации хромосом, при которых хромосомы прикрепляются друг к другу (робертсоновские) или участки разных хромосомах меняются местами (взаимные или реципрокные). Примерно 1 из 900 человек имеет робертсоновские транслокации с участием хромосом 13, 14, 15, 21, 22. Примерно 1 из 625 человек имеет взаимные транслокации. Для выявления наличия транслокаций может быть проведено кариотипирование обоих партнеров. Пары с транслокациями могут иметь периодические потери беременности, или потомство с психическими или физическими проблемами. При сбалансированной транслокации, когда нет дополнительного или отсутствия хромосомного материала, и разрыв в хромосоме не нарушает функции генов, человек не страдает. Носители сбалансированных транслокаций могут быть затронуты сложными врожденными пороками развития, которые могут или не могут быть связаны с наследственным заболеванием. При несбалансированной транслокации, при которой существует или отсутствует дополнительный материал хромосом, отдельные личности, как правило, не будут затронуты, хотя у некоторых будет наблюдаться снижение фертильности. Однако существует риск того, что яйцеклетки или сперматозоиды от такого человека могут иметь несбалансированные транслокации, в результате чего эмбрион будет несбалансированным. Это может привести к неудаче имплантации, повторному невынашиванию, или потомству с психическими или физическими проблемами.
  • Пары с аутосомно-доминантными заболеваниями, при которых будут затронуты 50% эмбрионов. Пары, которые имеют данные нарушения в семейном анамнезе, или являются носителями, или страдают от наследуемых заболеваний.

Пары с повторными неудачами ЭКО.

  • Пары с историей бесплодия могут быть в состоянии определить этиологию, и, следовательно, выбрать соответствующее лечение.
  • Парам из группы риска для наследования потомством болезни с угрозой для жизни, болезни с поздним началом (болезнь Хантингтона), предпочтительно планировать, выбрать соответствующие методы лечения, или ускорить процесс диагностики (например, ранней диагностики рака молочной железы)
  • Пары, желающие потомство для производства HLA-совпадающих стволовых клеток, для страдающего ребенка со смертельным заболеванием.

Используемые методы

Для анализа на наличие генетических дефектов эмбриона, из него необходимо удалить либо первое полярное тельце из неоплодотворенной яйцеклетки и/или 1 или 2 клетки от каждого эмбриона. Это называется биопсией яйцеклетки или эмбриона и обычно делается перед тем, как происходит оплодотворение, или через 3 дня после оплодотворения. Биопсия на 6-10 клеточной стадии не оказывает отрицательного влияния на преимплантационное развитие. На этом этапе каждая клетка имеет полный набор хромосом. Обычно из эмбриона удаляется только одна клетка, так как ожидается, что будут одинаковыми со всеми другими клетками в эмбрионе. Иногда необходимо удалить вторую клетку из эмбриона, например, если сигнал в первой не обнаружен. Для диагноза предрасположенности с помощью первого и второго полярных телец, как показателей генетического статуса яйцеклетки, используется анализ методом FISH. Недостатком анализа полярных телец заключается в том, что он не принимает во внимание отцовские анеуплоидии.

Анализ биопсированной клетки использует один из двух методов:

  • Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH): биопсированная клетка фиксируется на предметном стекле, нагревается и охлаждается, и ее ДНК "помечается" цветными флуоресцентными красителями, называемыми зондами (маленькие кусочки ДНК, которые соответствуют исследуемым хромосомам), по одному для каждой определяемой хромосомы. В настоящее время может быть идентифицировано 8 из 23 хромосом. После завершения эмбриолог учитывает цвета под мощным микроскопом и в состоянии, в большинстве случаев, отличить нормальные от аномальных клеток. Этот процесс занимает около суток. Нормальные эмбрионы будут либо перенесены в матку на 4-й день после поиска яйцеклеток, или подвергнутся продленному культивированию и будут перенесены на 5-й день, как бластоцисты. Клетки, использовавшиеся для ПГД, больше не жизнеспособны, и не будут возвращены в эмбрион, но могут быть сохранены для будущих исследований.
  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР): методика, которая увеличивает количество копий специфичных регионов ДНК, чтобы произвести достаточное для анализа количество ДНК. ДНК является двухцепочечной (за исключением некоторых вирусов), и две цепи соединяются очень специфическим образом. "Последовательность кирпичиков" генов представляет собой определенный порядок появления 4-х различных дезоксирибонуклеотидов в сегменте ДНК. Эти 4 компонента: аденин (А), тимидин (T), цитозин (C), и гуанин (G). Последовательность этого 4-буквенного алфавита генерирует состав гена. При этой методике ДНК нагревают (денатурируют), чтобы разделить 2 нити. Далее добавляются праймеры и ДНК охлаждается, с тем чтобы опять образовались двойные нити. Затем в циклы добавляют ферменты, которые могут "прочитать" последовательность гена, что приводит к умножению ДНК. ПЦР используется для диагностики ген-специфических заболеваний, так же как и для выявления болезнетворных вирусов и/или бактерий, или в криминалистике в связи с подозрением в совершении преступления.

Читайте также

www.baby-ivf.ru

Предимплантационная диагностика эмбрионов (ПГД): этапы процедуры

Исследование зародыша непосредственно перед имплантацией его в маточный эпителий проводится при экстракорпоральном оплодотворении и направлено на выявление патологий или генетических отклонений в развитии эмбриона. В каких случаях возможна и как проходит предимплантационная диагностика?

Показания к предимплантационному исследованию

Преимуществом метода ПГД является уменьшение рисков неправильного развития эмбриона, именно поэтому, проведение исследование актуально для пар, имеющих тяжелую генетическую наследственность или страдающих заболеваниями репродуктивной системы.

Показания к ПГД

Целями проводимых исследований являются:

  1. Отбор правильно развитых эмбрионов, с отсеиванием зародышей с аномалиями в строении.
  2. Обнаружение развития генетических патологий.
  3. Определение пола будущего ребенка, для исключения наследственных заболеваний, связанных с половыми признаками.
  4. Выявление причин неудачной имплантации.
  5. Определения резус-фактора зародыша для предотвращения конфликта с материнским организмом.

Таким образом, показанием для PGD являются:

Какие эмбрионы исследуются

Правила процедуры диагностики предусматривают исследование эмбриона с 1 по 5 день развития, в зависимости от целей процедуры.

Непосредственно перед PGD, проверяется морфологическое строение зародыша, его жизнеспособность.

Трехдневный эмбрион для предимплантационной диагностики

На данном этапе отсеиваются все эмбрионы, имеющие явные патологии в строении тела. Далее происходит само диагностирование, при котором проверяется 1 из 4-6 клеток.

Методы диагностики

Предимплантационная диагностика эмбрионов предполагает использование молекулярных или молекулярно –цитогенетических методов исследования.

FISH

Данный метод специализируется на выявление количественных и качественных изменений в строении клетки, но используется в последнее время достаточно редко, поскольку не позволяет проверить все хромосомы, ограничиваясь лишь небольшой их частью, что значительно снижает эффективность диагностирования.

Метод FISH

CGH

Наиболее распространенный способ, позволяющий полностью проверить все 24 хромосомы на наличие аномалий.

Метод ПГД — CGH

ПЦР

Подходит для выявления мутаций генов, хромосомных патологий и определения резус-фактора зародыша.

Данный метод предполагает обнаружение генетических отклонений на основании материала родителей и близких родственников и отличается меньшей продолжительность времени диагностирования.

NGS

Инновационный метод, основывающийся на определении последовательности в молекулах ДНК, повышающий вероятность успешного ЭКО до 70%.

Метод предимплантационной диагностики NGS

Как проходит процедура

Предимплантационная диагностика возможна при экстракорпоральном оплодотворении с ИКСИ (искусственном внедрении сперматозоида в созревшую яйцеклетку). Забору клеток зародыша предшествует выявление генных аномалий у родителей.

ВАЖНО!

Если не удается точно определить тип генных мутаций родителей или близких родственников, процедура диагностики является нецелесообразной.

Начиная с дня оплодотворения яйцеклетки и по 5 день развития зародыша проводится забор клеток для анализа, путем микрохирургического вмешательства – биопсии.

Схема проведения PGD

К крайнему сроку проведения процедуры, эмбрион имеет от 6 до 8 бластомеров, особенностью которых является способность к взаимозамещению, поэтому забор материала никак не отражается на дальнейшем развитии будущего ребенка.

Итак, диагностика может проводиться:

  1. В день оплодотворения. Развитие на начальном этапе не позволяет эмбриону нести информацию о большинстве генетических заболеваний, половой принадлежности и его резус-факторе.
  2. На 3 день развития. В это время зародыш имеет около 5 клеток, что позволяет выявить гораздо больше возможных аномалий.
  3. На 4 день развития. Исследование во время стадии морулы снижает вероятность повреждения эмбриона до 0.
  4. На 5 день развития. Именно на данном этапе возможно получить достоверную информацию обо всех возможных патологиях и генетическом статусе зародыша в целом.

Развитие эмбриона вне материнского организма не может длиться более 5 суток, поэтому исследование, в большинстве случаев, проводится на 3 сутки после оплодотворения, а длительность диагностики не превышает 2-х дней.

Биопсия на 5 день развития предполагает криозаморозку и имплантацию здоровых эмбрионов во время следующего менструального цикла.

Существует еще один вид исследования – диагностика яйцеклетки, позволяющий выявить отклонения еще до оплодотворения. Особенностью такого анализа является обнаружение патологий исключительно в материнском организме, а результатом становится отбор зародышей, находящихся в здоровых яйцеклетках.

Результаты ПГД

Предимплантационная диагностика эмбрионов значительно увеличивает шансы на рождение здорового ребенка, даже при неблагоприятном генофонде.

Результатом произведенных исследований становится:

  • Увеличение вероятности наступления беременности.
  • Увеличение шансов на ее благоприятный исход.
  • Минимизация рисков наступления многоплодной беременности, поскольку она влечет дополнительные риски при вынашивании и родоразрешении.
  • Минимизация вероятности появления на свет ребенка с патологиями в развитии.

Заключение

Абсолютно каждое вмешательство в естественные процессы влечет определенные риски, предимплантационная диагностика – не исключение.

Будущим родителям необходимо знать, что исследование способно привести к повреждению зародыша во время микрохирургического вмешательства (случается меньше, чем в 1% случаев).

Кроме того, вероятность ошибочного заключения наблюдается в 10% случаев, 3,5% из которых приходятся на признание аномально развитого эмбриона здоровым.

ПГД при ЭКО – не единственное исследование, которое необходимо супружеской паре, несмотря на эффективность методов, диагностика не исключает полного перинатального обследования.

Видео: Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД)

detieco.ru

Преимплантационная генетическая диагностика. ПГТ методом NGS в Москве


ЭКО является не только высокоэффективным методом лечения бесплодия, но и вспомогательным методом (пока единственным), который, благодаря доступу к яйцеклетке человека, позволяет осуществлять диагностику многих наследственных (генетических) заболеваний еще до переноса эмбрионов в матку матери, т.е. до наступления беременности. Этот метод получил название преимплантационного генетического тестирования (ПГТ), предыдущее название – преимплантационная генетическая диагностика - ПГД.


До последнего времени единственным способом предотвратить рождение больного ребенка было прерывание беременности после того, как в результате диагностических процедур (пренатальная диагностика) получали подтверждение генетической патологии у плода. В случае преимплантационного генетического тестирования есть возможность отобрать эмбрионы без генетических аномалий еще до стадии переноса.

Как делается ПГД эмбриона?

Как правило, у одной женщины получают несколько яйцеклеток, и почти всегда есть возможность выбрать хотя бы одну здоровую, которая даст жизнь здоровому ребенку. Полученные яйцеклетки сначала оплодотворяют, затем делают биопсию эмбрионов, отбирают с помощью генетического анализа здоровые эмбрионы и переносят их в матку женщины. Болезни, которые ребенок может получить от отца, можно определить только путем биопсии эмбриона.


Преимплантационная диагностика является единственной альтернативой методам пренатальной диагностики.

Типы ПГТ (Преимплантационная генетическая диагностика)

ПГТ разделяют на несколько типов по целевому направлению диагностики.

ПГТ-А – анализ анеуплоидий, направлен на выбор эмбриона с нормальным количеством хромосом. Чаще всего данный подход применяется для увеличения шансов на имплантацию при переносе. Он позволяет быстрее получить желаемую беременность (повышает шансы до 70-75%) и позволяет избежать переноса анеуплоидных эмбрионов, например, с синдромом Дауна.

ПГТ-М – тестирование на конкретную мутацию, выявленную у родственников. Это возможность исключения моногенных (обусловленных одним геном) заболеваний у переносимых эмбрионов. Необходима дополнительная предварительная диагностика родителей для уточнения, в каком именно участке гена могла произойти мутация. Стоит отметить, что диагностика проводится только на конкретную мутацию и гарантирует ее отсутствие в переносимом эмбрионе, но совершенно ничего не говорит об отсутствии других нарушений в его геноме.

ПГТ – SR – тестирование эмбрионов на наличие специфических перестроек в их ДНК, которые так же могут приводить к различным заболеваниям и передаваться по наследству.


Показания к ПГД (ПГТ)

Какие болезни выявляет ПГТ-М? Уже сегодня возможна «выбраковка» до беременности эмбрионов с такими наследственными заболеваниями, как муковисцидоз, гемофилия А, болезнь Тей-Сакса, дефицит 1-антитрипсина, миатрофия Дюшена и др. (см. список).

Список некоторых наиболее распространенных наследственных заболеваний:

  • муковисцидоз,
  • фенилкетонурия,
  • болезнь Тэй-Сакса,
  • болезнь Гоше,
  • пигментный ретинит,
  • серповидно-клеточная анемия,
  • талассемия,
  • анемия Фанкони,
  • гемофилия,
  • миодистрофия Дюшена,
  • миодистрофия Бейкера,
  • пузырчатка,
  • поликистоз почек,
  • болезнь Альцгеймера,
  • ретинобластома,
  • семейный рак груди,
  • семейный аденоматозный полипоз,
  • семейный канцероидный синдром,
  • нейрофиброматоз,
  • гидроцефалия,
  • хорея Гентингтона,
  • синдром Х-ломкой хромосомы,
  • спиноцеребральная атаксия.

 

Наши преимущества

ребенка родилось благодаря нашим специалистам

 

С чего начинается ПГТ?

Как правило, у одной женщины получают несколько яйцеклеток, и почти всегда есть возможность выбрать хотя бы одну лучшую, которая даст жизнь здоровому ребенку. Полученные яйцеклетки сначала оплодотворяют, затем эмбрионы культивируют и на 5-6-й день делают биопсию трофэктодермы – клеток, которые участвуют в формировании плаценты. 

Такой подход меньше всего сказывается на жизнеспособности эмбрионов и, в отличие от биопсии на 3-й день, наименее травматичен. Полученные клетки под микроскопом помещают в специальные пробирки и передают в генетическую лабораторию. Среди всех биоптатов, отбирают с помощью генетического анализа те эмбрионы, что не несут патологии и именно их переносят в матку женщины.

Что дальше? ПГТ методом NGS

Секвенирование нового поколения – NGS (Next Generation Sequencing) – это метод определения последовательности нуклеотидов в ДНК.


В настоящее время NGS является наиболее распространенным методом анализа генетического статуса эмбриона в проколах преимплантационного генетического тестирования (ПГТ). Он имеет очень высокую чувствительность и специфичность, что позволяет избежать ошибок в диагностике и перекрывать практически все основные потребности клинической генетики и ПГТ. 

Технология позволяет проводить анализ последовательности ДНК одновременно в большом количестве участков хромосомы, что дает возможность значительного ускорения всего процесса и снижает себестоимость. Для определения последовательности нуклеотидов (структур ДНК) необходимо создать копию исследуемой ДНК. 

Существует несколько путей определения последовательности нуклеотидов в интересующей нас ДНК при помощи NGS. Эту последовательность можно определить с помощью измерения кислотности среды (ph) при удлинении копируемой цепочки; второй путь заключается в использовании «меченых» нуклеотидов: их считывает светочувствительная матрица, а компьютер обрабатывает информацию и строит цепочку ДНК.


Оба метода требуют получения достаточного для анализа последовательности количества ДНК. В случае работы с биоптатом трофэктодермы (при проведении ПТГ) речь идет о тонком процессе выделения ДНК из единичных клеток. Для увеличения количества ДНК и возможности безошибочной диагностики применяют метод т.н. «полногеномной амплификации» (WGA), позволяющей в миллионы раз увеличить копии всей ДНК в образце. Трудность в том, что WGA не идентифицирует отдельно источник ДНК, то есть одинаково эффективно будет удваивать и ДНК клеток эмбриона и ДНК, занесенную в реакцию извне. 


Поэтому чистота выполнения всех процедур биопсии и подготовки пробы к анализу критична для адекватного ответа генетической лаборатории и проверяется множественными контролями. Например, в нашей лаборатории–партнере всегда проводится контроль чистоты вновь приготовленного «буфера» (среды с ДНК), контроль его функциональной работы, контроль правильного раскапывания буфера в пробирки для анализа, контроль чистоты индивидуально для каждого образца, контроль  работоспособности буфера с единичными клетками. Эмбриологи нашей лаборатории, в обязательном порядке, проходят тестовую биопсию, позволяющую минимизировать человеческий фактор ошибок.

После WGA возможно проведение уже самого анализа последовательности полученной ДНК. Все описанные этапы автоматизированы и проходят в специальном приборе под контролем компьютерной программы. На первом этапе создается так называемая библиотека случайных последовательностей ДНК – геном режется на небольшие фрагменты длиной от 25 до 20 000 нуклеотидов, каждый из которых присоединяется к специальным адаптерным участкам с известной последовательностью. 

Второй этап — создание копий этих последовательностей при помощи эмульсионной ПЦР (когда в каждой капельке масла в суспензии ферментов амплифицируется индивидуальная молекула ДНК). Третий этап — определение первичной структуры всех фрагментов тем или иным способом. И в заключении, обработка полученных данных, их анализ и интерпретация.

Не теряйте время! Запишитесь на прием прямо сейчас!

Нажимая кнопку “Отправить заявку”, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных в соответствии с условиями

* - обязательные поля для заполнения

Очевидно, что точность определения последовательности ДНК будет зависеть от количества прочтений – ридов (сколько раз один и тот же участок прошел анализ) матрицы – чем их больше – тем точнее. В современных протоколах для ПГТ-А используют сотни тысяч таких ридов, а при анализе единичных мутаций конкретного гена (ПГТ-М) – миллионы. За счет этого удается добиться поразительной точности анализа и исключить ошибки неправильного прочтения нуклеотидов.

Заключительным этапом является т.н. биоинформатический анализ полученных данных. Зачастую именно анализ и выявление клинически-значимых отклонений последовательности ДНК и определение критериев их значимости занимает больше времени само определение последовательности. Метод NGS в практике ПГТ дает практически неограниченные возможности; определение хромосомных поломок – лишь незначительная толика того, что может дать этот метод. Достаточно упомянуть о том, что с помощью NGS можно расшифровать весь геном человека!

Выбор правильного подхода и цели исследования определяются на этапе генетического консультирования (желательно до начала процедуры ЭКО!) и может потребовать дополнительных подготовительных исследований ДНК родителей или родственников в случае программ ПГТ при подозрении на наследственное заболевание. Как правило, в большинстве случаев ПГТ достаточно довольно поверхностного анализа генетической информации эмбриона или его родителей.

Счастливые истории

Мария

10 дек. 2019

Два года безуспешного хождения по врачам вместе с мужем. Нам посоветовали обратиться в Фертимед к Жорданидзе Диане Омаровне. Замечательный врач! РезулЧитать историю

Алипат

21 окт. 2019

Благодаря Вам, Вашей клинике и Смирновой Анне Анатольевне я пришла к заветной мечте после 7 лет скитаний от одного врача к другому. Благо, узнала про Читать историю

Наталия

09 окт. 2019

Напишу и я историю. 7 лет бесплодия, 3 попытки ЭКО. От отчаяния иду сама прошу направление на лапароскопию. И в реанимации разговорилась с женщиной. КЧитать историю

Наталья

20 фев. 2019

Здравствуйте. Хочу выразить огромную благодарность вашему центру. Сложилось впечатление о сплоченном коллективе, настроенном на результат. Лечились у Читать историю

Андрей и Александра

14 фев. 2019

Большая благодарность, от всей нашей большой семьи, всем сотрудникам центра за вашу работу, за улыбку на лице и веру в положительный результат! МихаиЧитать историю

Валентина

15 янв. 2019

Наш с супругом путь к счастью быть родителями начался в 2012 году после того, как отгремели звуки свадебного марша Мендельсона. Как и все, мы думали, Читать историю

Екатерина

16 мая 2019

После замужества не могла забеременеть в свои 22 года, оказалось проблемы с маточными трубами. Когда я узнала, что самостоятельно не смогу никогда имеЧитать историю

Ольга

02 мар. 2019

Хочется выразить огромную благодарность клинике ФертиМед, а особенно, врачу Асланбеку Руслановичу, за хорошее, трепетное отношение, а так же, за то, чЧитать историю

Ирина

23 июн. 2018

Хочу выразить огромную благодарность замечательному доктору клиники ФертиМед Торчинову Асланбеку Руслановичу за нашего долгожданного сыночка. На протяЧитать историю Необычный, наверное, отзыв у меня получится, так как это отзыв от новоиспечённого отца, да и вообще, я не очень понимаю, как можно выразить Вам нашу, Читать историю

Екатерина

15 дек. 2017

Впервые мы обратились в ФертиМед в далеком уже 2010 году, после 3х лет хождения по врачам и сдачи всяких экзотических анализов. К сожалению, первая поЧитать историю

Екатерина

25 сен. 2017

Вышла замуж в 22 года, мужу было 23, о том что могут быть проблемы с зачатием никогда не могла подумать, оказалось после перенесено аппендицита в детсЧитать историю

Елена

23 мая 2017

Мы с мужем 6 лет мечтали о ребенке. У меня от первого брака есть взрослая дочь (20 лет),у мужа детей не было. Прошли несколько попыток Эко в рЧитать историю

Елена

27 фев. 2017

Мы - счастливые родители! Спасибо огромное от всей души клинике ФертиМед и лично нашему доктору Диане Омаровне за то, что вы делаете, за то, что помогЧитать историю

Нина и Петр

27 сен. 2017

На свою спермограмму мой муж смотрел, как на приговор – ни одного сперматозоида. И причина непонятна. Была одна надежда – на ТЕЗУ. Нам объяснили, что Читать историю Я была готова на всё, чтобы родить ребенка. К своим 32 годам я уже перенесла пять операций на яичниках и от них остался один крошечный кусочек. На стиЧитать историю

Ольга

29 июл. 2016

Я никогда не думала, что будут проблемы с детьми, но оказалось, обе трубы  непроходимы. Первая же попытка ЭКО в ФертиМеде закончилась рожденЧитать историю

Мария

27 июн. 2016

У меня было две внематочных и никаких шансов родить своего ребенка.      
Ирония заключалась в том, что мой ближаЧитать историю

Валентина и Михаил

14 окт. 2016

Мы с мужем прилетели с Камчатки. Очень хотели второго ребенка. ФертиМед посоветовали знакомые. Говорят, что у таких маленьких и худых женщин, как я, гЧитать историю

Софья

27 июл. 2016

В ФертиМеде сначала не поверили, что у меня было 43 попытки ЭКО. В глазах персонала явно читалась недоверие и сочувствие – мол, женщина поехала головоЧитать историю Когда я оставила мужа, с которым у нас было трое детей, никто этого понять, конечно, не мог, да и не хотел. И еще больше никто не мог понять то, что мЧитать историю

Валентина и Виктор

01 ноя. 2016

Наша Даша  растет, в свои 1 год и 9 месяцев она очень смышленая девочка, учит азбуку в своем собственном планшете (настоящем, не игрушечЧитать историю

Кристина

05 апр. 2016

Мне было 45, когда я созрела для ЭКО. При первой же встрече врач в ФертиМеде сказала: никаких шансов на ребенка со своими яйцеклетками. Сначала были шЧитать историю Я на 29 лет моложе мужа. У него трое взрослых детей, но мне очень хотелось своего и нашего совместного ребенка. Несколько последних лет муж очень болеЧитать историю Я-счастливая мама! 5 лет стояния березкой, измерения базальной температуры, отслеживание овуляции, гистероскопия, лапарокопия (у мужа тоже), клостилЧитать историю Отправить свою историю

Однако, несмотря на огромные преимущества перед другими методами анализа генетической информации, метод NGS не лишен недостатков. К ним можно отнести невозможность выявления некоторых крупных мутаций, а так же необходимость установления исходного количества молекул ДНК в образце. Описанные ограничения можно обойти с использованием дополнительных методов (ПЦР в реальном времени и CGH) и дополнительного контроля чистоты каждого образца.

В последние годы наблюдается тенденция к значительному увеличению возраста, при котором женщины стремятся иметь ребенка. Однако способность к естественному зачатию с возрастом резко снижается, что связано с большим числом хромосомных нарушений в их яйцеклетках. Организм сопротивляется наступлению беременности больным ребенком, поэтому оплодотворение и имплантация происходят редко, и при этом риск рождения ребенка с хромосомными дефектами очень велик. Тот же механизм «выбраковки» дефектных яйцеклеток и эмбрионов срабатывает и при использовании методов искусственного оплодотворения, поэтому частота наступления беременности после ЭКО у женщин старше 38 лет значительно ниже, чем у более молодых женщин.

В тех случаях, когда немолодая женщина во чтобы то ни стало хочет родить ребенка, ей рекомендуется прибегнуть к преимплантационной диагностике количества хромосом – ПГТ-А. Оказалось, что частота наступления беременности при таком подходе у женщин старше 42 лет вполне сравнима с таковой у молодых. В данном случае ПГТ-А помогает решить сразу две задачи: исключить вероятность рождения больных детей и резко повысить вероятность наступления беременности.

Не теряйте время! Запишитесь на прием прямо сейчас!

Нажимая кнопку “Отправить заявку”, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных в соответствии с условиями

* - обязательные поля для заполнения


ПГТ мифы и реальность?

В заключение следует обратить особое внимание на некоторые заблуждения, касающиеся метода ПГД (ПГТ) и его ограничений. Все ограничения обязательно указаны в Информированном согласии, которое пациенты перед принятием решения о биопсии.

 ПГД (ПГТ) эмбрионов, направленная на выявление определенного типа нарушений, может выявить только этот тип нарушений и никакой другой, например ПГД на 46 хромосом направлена на исключение нарушений численности и крупных изменений структуры хромосом у эмбрионов и не выявляет прочие генетические аномалии, например, моногенные наследственные заболевания, микроделеционные синдромы, многофакторные наследственные заболевания.

 ПГТ является крайне эффективным методом выявления генетических нарушений у эмбрионов, однако нужно понимать, что точность диагностики все равно не равна 100%. Риск ошибочной диагностики мал, и составляет менее 2%. Ошибки возможны по причине, например, мозаицизма эмбриона (когда в разных клетках может оказаться разный набор хромосом). Существует и риск того, что не пройдет (или неправильно) т.н. реакция амплификации ДНК. Определенные риски таит в себе и сама процедура биопсии эмбриона. Повторим: все эти риски крайне малы и вероятность ошибок/осложнений близка к нулю, но о них не нужно забывать.

 Известно, что морфология эмбриона не всегда отражает его генетическое «здоровье». Поэтому мы стремимся к тому, чтобы провести биопсию и диагностику всех доступных (готовых выдержать процедуру) эмбрионов. И, зачастую, худший по качеству оказывается здоровым, а в лучшем находят генетические поломки.

 Наконец, беременность, наступившая после переноса эмбриона, перенесшего биопсию, ничем не отличается от таковой, наступившей самостоятельно. Это тоже доказанный факт.


Хотим подчеркнуть, что в тех случаях, когда пациентки старшей возрастной группы (40+) принимают решение зачать ребенка с помощью ЭКО, преимплантационная диагностика хромосомных нарушений (ПГД) является самым разумным подходом, позволяющим повысить шансы на здоровое потомство.


Стоимость ПГД (ПГТ)

Возможность проведения преимплантационной диагностики (тестирования) диагностики во всем мире ограничивается стоимостью. Стоимость ПГД в Москве приблизительно одинакова во всех клиниках, так как само тестирование проводится ограниченным числом лабораторий, которые имеют дорогостоящее оборудование и обученный персонал. Разница между клиниками в наличии эмбриологов, умеющих проводить биопсию.

Эта сложнейшая манипуляция по изъятию у эмбриона нескольких клеток, отражающих его генетические особенности, должна быть проведена эмбриологом, имеющим специальную подготовку и опыт проведения подобных тончайших манипуляций. В нашей клинике работают эмбриологи, прошедшие европейскую сертификацию, и выполняющие десятки подобных манипуляций в месяц.

Теги:

Экстракорпоральное оплодотворение Стимуляция овуляции Трансвагинальная пункция яичников Забор яйцеклетки для ЭКО Перенос эмбрионов ИКСИ оплодотворение ИКСИ высокого разрешения ИМСИ, ПИКСИ ТЕСЕ, ТЕСА Искусственное оплодотворение ПДГ Эмбриона

Не теряйте время! Запишитесь на прием прямо сейчас!

Нажимая кнопку “Отправить заявку”, Вы даете согласие на обработку Ваших персональных данных в соответствии с условиями

* - обязательные поля для заполнения

www.fertimed.ru

Предимплантационная генетическая диагностика в Перми

Преимплантационная диагностика - это специальный молекулярно-биологический метод исследования, позволяющий выявить у эмбриона имеющиеся генетические нарушения (хромосомные аномалии). ПГД позволяет исключить более 150 различных видов патологий эмбрионов, которые угрожают благополучному вынашиванию беременности, здоровью и жизнедеятельности плода.

Таким образом, главный результат проведения данного исследования – женщине в полость матки помещают только здоровые жизнеспособные эмбрионы.

ПГД эмбриона проводится только в рамках программы ЭКО - экстракорпорального оплодотворения. Диагностика проводится в преимплантационный период - до внедрения эмбриона в полость матки. Клетки эмбриона исследуются на 3-5 день его развития. Для имплантации выбирают только здоровые экземпляры, без патологий.

Проведение ПГД обладает еще одним значимым преимуществом. Здоровые жизнеспособные эмбрионы, не участвующие в имплантации, могут быть криоконсервированы – заморожены, и использованы для повторных беременностей методом ЭКО. Малыши, рожденные в криопрограммах, совершенно здоровы, и не отличаются от детей, которые были зачаты с помощью ЭКО без применения криоконсервации, или естественным путем.

Специалисты клиники «Мать и дитя» в Перми используют в своей практике современные эффективные методики преимплантационной генетической диагностики. Это позволяет определить большинство (более 150 разновидностей) хромосомных патологий плода, в частности, синдром Дауна - одну из самых распространенных патологий. Хорошая техническая база нашей клиники и высокая квалификация специалистов – генетиков и эмбриологов, является залогом компетентного проведения молекулярно-биологической диагностики, достижения беременности, благополучного вынашивания ребенка и рождения здорового малыша. Цена ПГД зависит от применяемой модификации методики.

Клиника «Мать и дитя» Пермь рекомендует проведение ПГД в следующих случаях:

  • возраст женщины старше 35 лет;
  • возраст будущего папы старше 35 лет;
  • наличие хромосомных патологий у кого-то из будущих родителей;
  • в анамнезе - привычное невынашивание беременности;
  • при неудачах ЭКО.

perm.mamadeti.ru

Преимплантационное генетическое тестирование эмбрионов

Описание

Биопсия трофэктодермы не входит в стоимость исследования и оплачивается отдельно. 

Биопсия трофэктодермы эмбрионов (партия)  - 15 500 р.


Современная медицина знает, как обойти генетический фактор

Генетические нарушения – распространенная причина бесплодия и невынашивания беременности. Даже если получилось зачать, остается страх за будущее малыша. Неизвестно, что покажет скрининг во время беременности. Поэтому многие пациенты воспринимают генетический фактор как приговор. Бояться не нужно. В современной медицине есть эффективные способы обойти сложности, заданные нашей генетикой.

Обследование эмбриона до наступления беременности

Метод преимплантационного диагностического тестирования (ПГТ) предназначен для пациентов, которые вступили в протокол ЭКО. Он позволяет обследовать эмбрион до переноса в матку, то есть до того, как наступила беременность. Из нескольких эмбрионов для переноса можно выбрать именно тот, который не имеет генетических нарушений. 

Как проводится ПГТ

На 5 день эмбрион достают из чашки Петри, где он находится поле оплодотворения. Забирают 3-4 клетки. Затем эмбрион замораживают. Клетки в течение 30 дней исследуют в лаборатории при помощи высокоточного оборудования. По итогам исследования принимается делается заключение: здоров эмбрион или нет. После этого принимается решение о переносе.

Какова результативность метода

Результативность переноса эмбриона после проведения ПГТ увеличивается до 60-70%.

Каких патологии выявляет тестирование

Существует несколько видов ПГТ, которые позволяют выявить все основные генетические патологии эмбриона.

  • ПГТ-А (скрининг) – метод диагностики, который позволяет выявить нарушения, связанные с уменьшением или увеличением числа хромосом. Своевременно выявив изменение числа хромосом у эмбриона, вы прогнозируете возможные нарушения имплантации и прерывания беременности на ранних сроках, формирование таких наследственных патологий как синдромы Дауна, Клайнфельтера, Шерешевского-Тернера.
  • ПГТ-М. Позволяет выявить генетические заболевания, которые относятся к типу моногенных (муковисцидоз, синдром Кляйнфельтера, мутации AZF, синдром Каллмана и др.). Моногенные заболевания вызываются мутациями – изменениями в конкретном гене. Проведение исследования помогает перенести на ЭКО только те эмбрионы, которые не унаследовали данное заболевание. 
  • Определение хромосомных перестроек. Данный вариант ПГТ показан парам, у которых невынашивание беременности и иные генетические патологии связаны с хромосомными перестройками. При хромосомной перестройке (транслокации) части двух хромосом меняются местами друг с другом, но не всегда сбалансированы по размеру. Проведение ПГТ помогает определять и переносить только те эмбрионы, которые не имеют отклонений.

Показания к проведению тестирования

Проведение ПГТ будет полезным, вступившим в протокол ЭКО, но есть ряд показаний, при которых тестирование может существенно повысить вероятность успешного переноса и рождения здорового ребенка:

  • • возраст матери 35 лет и более;

  • • возраст отца 40 лет и более;

  • • 2 и более потери беременности;

  • • 2 и более неудачных попытки ЭКО;

  • • 3 и более неудачно перенесенных эмбрионов хорошего качества

  • • желание пары любого возраста увеличить вероятность рождения здорового ребенка.

  • • выявленный статус носительства заболеваний у родителей; 

  • • хромосомные аномалии у детей, плодов, ближайших родственников, наличие в семье больного ребенка;

  • • риск развития резус-конфликта;

  • • генетические причины мужского бесплодия (муковисцидоз, синдром Кляйнфельтера, мутации AZF, синдром Каллмана). 

Преимущества

  • • Репродуктолог не переносит заведомо больные эмбрионы. 

  • • Даже если у родителей генетические нарушения, можно выбрать здоровый эмбрион.

  • • Шансы на прикрепление эмбриона увеличиваются. 

  • • Снижается вероятность замершей беременности и выкидыша.

  • • Уменьшается стресс, поскольку наступление и прохождение беременности становится более прогнозируемым. 

Недостатки

  • • Проверка даже одного эмбриона стоит недешево.

  • • Метод безошибочно определяет количество хромосом, но не позволяет исследовать гены, которых до 28000 в одной хромосоме.

  • • Сохраняется небольшой риск повреждения эмбриона при взятии клеток.

Подробнее о технологии ПГТ читайте в статье Нуриева Н.Р. Преимплантационное генетическое тестирование: переносим здоровые эмбрионы и снижаем риск выкидыша

www.nnplus.ru

На сколько важно проводить генетическую диагностику эмбрионов перед подсадкой?

Здравствуйте. Большинство из 25 000 или около того генов в геноме человека были идентифицированы за последние годы. Молекулярный анализ генов становится все проще и эффективнее. Как следствие, предимплантационный генетический скрининг в рамках протокола ЭКО теперь может предотвратить рождение у пар, сталкивающихся с проблемой фертильности, детей с различной генетической патологией, такой как муковисцидоз, мышечная дистрофия, серповидно-клеточная анемия, болезнь Тея-Сакса, болезнь Гоше, микроделеция AZF, умственная отсталость и т. д. Ведь эти проблемы беспокоят каждую женщину, которая когда-либо забеременела. С помощью предимплантационнлй диагностики мы также можем лучше понять проблему рецидивов раннего выкидыша и генетических ошибок, возникающих при беременности у пожилых матерей.

Предимплантационный скрининг не следует рассматривать как создание «дизайнерских младенцев», это - неправильный термин, используемый только прессой, а не врачами. Мы не могли бы манипулировать (даже если бы хотели) особенностями или характеристиками потомства. Это просто выдумка. Все, что мы можем сделать, - это отбраковать эмбрионы с душераздирающими и разрушительными генетические заболевания, вызванными наличием мутаций у одного или обоих супругов. Существует два различных типа предимплантационной генетической диагностики: либо для устранения родительских мутаций, либо для проверки количества хромосом (скрининг анеуплоидии). Последний используется широко, но обычно более вреден, чем полезен по интересным причинам, которые я объясню позже. Первый вид скрининга, устраняющий мутации носителей генетического заболевания, чрезвычайно эффективен и выгоден.

Когда эмбрион достигает третьего дня развития, он обычно имеет восемь клеток. Одна или две из этих клеток, называемые «бластомерами», могут быть удалены из эмбриона с помощью техники микроманипуляции. Эмбрион обычно не повреждается и может развиваться так же, как если бы эта одна клетка никогда не была удалена. То же самое можно сделать с трофобластом пятидневных эмбрионов. Затем вы можете подвергнуть эти клетки генетическому анализу и узнать хромосомный состав зародышей, и несут ли они специфическую мутацию, вызывающую заболевание.

Тестирование ДНК и болезнь одного гена

Это наиболее подходящее указание для предимплантационной диагностики. Все, чем мы являемся физически, определяется примерно 25 000 генов, расположенных в нашей ДНК. Все ваше тело состоит из многих тысяч различных белков, структура и ориентация которых определяют невероятные механизмы вашего тела и мозга. Однако эти тысячи белков в свою очередь состоят из двадцати аминокислот. Разнообразие аминокислот, которые теоретически могут существовать, неограниченно. Химики могут синтезировать многие тысячи из них. Однако живая природа состоит только из двадцати определенных аминокислот, которые абсолютно одинаковы для всех живых существ на земле. Различия между живыми существами заключаются в различиях последовательностей этих двадцати аминокислот, которые составляют все различные белки, из которых они состоят. В свою очередь, эта последовательность аминокислот была определена последовательностью 4 основных букв, которые составляют нашу ДНК. Весь человеческий геном представляет собой 3 миллиарда пар оснований или «букв» ДНК. Конкретный набор комбинаций из трех букв ДНК представляет собой коды для каждой из двадцати аминокислот. Поэтому порядок, в котором буквы ДНК встречаются на хромосоме, определяет последовательность аминокислот, а это, в свою очередь, определяет белки, которые определяют все в нашем организме. Одна ошибка в аминокислотной последовательности в любом белке может вызвать резкое изменение его структуры и серьезное генетическое заболевание, такое как муковисцидоз или болезнь Тея-Сакса. Эти ошибки в последовательности ДНК могут быть легко диагностированы с помощью процесса (выполняемого в пробирке, а затем на матричном чипе или с помощью процесса, называемого ПЦР), который является основой предимплантационной диагностики для генетического заболевания, связанного с ошибкой одного гена.

Тестирование хромосом и скрининг на анеуплоидию

Это тип ПГД, который часто неуместен, пытается определить, какие эмбрионы приведут к развитию здоровой беременности и снизят риск выкидыша. Все наши 6 миллиардов ДНК «букв» расположены на сорока шести хромосомах, которые свернуты внутри ядра каждой отдельной клетки в вашем теле и разделены на двадцать три пары, двадцать две «аутосомные» пары и одну «половую» хромосомную пару, «Х» и «Y». Ребенок с двумя Х-хромосомами будет девочкой, а с одной Y-хромосомой и одной Х-хромосомой будет мальчиком.

Чтобы зачатие произошло, 23 хромосомы из набора мужа и 23 хромосомы из набора жены должны встретиться в момент оплодотворения и стать зародышем с новым нормальным набором из 46 хромосом. Процесс, при котором примитивные сперматозоиды и примитивные яйцеклетку теряют половину своего количества хромосом по мере превращения в сперму и готовые к оплодотворению яйцеклетки, называется «мейозом». Процесс старения яйцеклеток затрудняет им процесс мейоза. Вот почему яйцеклетки пожилых женщин с меньшей вероятностью приводят к формированию жизнеспособного эмбриона, а также потому, чтопочему пожилые женщины более бесплодны, чем молодые, и почему у пожилых женщин чаще случаются выкидыш или рождаются дети с отклонениями, такими как синдром Дауна.

Если есть ошибка в делении хромосом яйцеклетки, и одна из пар хромосом не может разделиться, то яйцеклетка будет иметь 24 хромосомы вместо 23. В синдроме Дауна, например, у эмбриона в общей сложности 47 хромосом вместо 46, потому что у него есть три набора хромосомы 21 вместо нормальных двух наборов. Этот вид хромосомной ошибки, при котором одна из хромосом имеет три копии вместо правильных двух копий, называется «трисомией». Все эти хромосомные ошибки, включая трисомии, моносомии и различные их комбинации, могут возникать практически в любой из хромосом, и эти ошибки, как группа, называются «анеуплоидией». Эти числовые хромосомные ошибки в клетке можно диагностировать путем процесса под названием FISH.

Большинство из этих хромосомных дефектов, которые возникают у эмбрионов человека, являются летальными и приводят либо к невозможности имплантации эмбриона, либо к выкидышу. Только редкие хромосомные дефекты, такие как трисомия 21 или синдром Дауна, приводят к рождению ненормального ребенка. Ничто в рамках процесса экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) или ИКСИ не увеличивает риск этих хромосомных нарушений.

Критика и ограничения ПГД

Одиночные генные дефекты - это редкие генетические заболевания, такие как муковисцидоз или микроделеция (их тысячи), которые встречаются у потомства бесплодных пар, которые являются носителями, и которые диагностируются с помощью ПЦР. Предимплантационная генетическая диагностика для таких пар чрезвычайно важна сегодня, потому что для проверки можно исследовать множественные последовательности ДНК около дефектного гена (связанные маркеры), а также саму мутацию. Генетический скрининг также очень важен в случаях повторного выкидыша, вызванного хромосомными транслокациями, для которых около 1,5% бесплодных пар являются носителями.

Тем не менее, предимплантационный скриниг для рутинного выявления анеуплоидии во время ЭКО для бесплодных пар недавно подвергся серьезной критике в Европе из-за нескольких проспективных рандомизированных контрольных исследований в Голландии и Бельгии. ПГД не удалось показать какого-либо улучшения клинического исхода ЭКО для женщин позднего репродуктивного возраста, а также в случаях повторных неудач в имплантации эмбрионов. На самом деле это снижает уровень беременности, и причина этого удивительна с точки зрения понимания нашей собственной специфической человеческой генетики.

В европейских исследованиях даже более молодых бесплодных пар было обнаружено, что только 36% эмбрионов, подверженных ПГД, являются хромосомно нормальными (когда удаляются и тестируются два эмбриона, а не один). Когда эмбрионы, диагностированные как хромосомно-аномальные на 3-й день (и, следовательно, не перенесенные в матку пациента), были повторно обследованы на 5-й день, только 54% оказались носителями этой аномалией. Было ясно, что уровень ошибок для метода FISH составляет всего 5%. Таким образом, это несоответствие в 50%, по-видимому, связано в основном с распространенностью эмбрионального мозаицизма. Это означает, что некоторые клетки у многих эмбрионов нормальные, а некоторые ненормальные. Таким образом, около 50% человеческих эмбрионов в европейских исследованиях были признаны мозаичными. Следовательно, использование предимплантационной диагностики может привести к отбраковыванию хороших эмбрионов (диагностированных как аномальные) и переносу патологических эмбрионов (диагностированных как нормальные). Интересно, что у всех нас, есть небольшое количество хромосомно-аномальных клеток. Даже бластоциста, где вы можете получить 5 клеток, часто будет содержать аномальные клетки, несмотря на то, что эмбрион на самом деле нормальный.

В целом, этот метод лучше всего подходит для носителей одного генного заболевания, которые не хотят, чтобы у ребенка было такое заболевание.

azf-deletsia-i-besplodie.ru


Смотрите также

Регистрация на сайте

Пароль будет отправлен тебе на e-mail.

 

×