Анализ пцр что это


что это такое, как проводится исследование, методы диагностики заболеваний

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.


ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати
Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.


Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

www.kp.ru

Полимеразная цепная реакция в реальном времени — Википедия

В молекулярной биологии, ПЦР в реальном времени (или количественная ПЦР, англ. Real-time PCR, qPCR, qRT-PCR) — лабораторный метод, основанный на методе полимеразной цепной реакции, используется для одновременной амплификации и измерения количества данной молекулы ДНК. Метод ПЦР в реальном времени включает в себя одновременно детекцию и количественное определение (измерение непосредственно количества копий, либо измерение копий относительно внесённой ДНК или дополнительных калибровочных генов) специфической последовательности ДНК в образце[1].

Метод использует общие принципы ПЦР. Основное отличие состоит в том, что измеряется количество амплифицированной ДНК в реальном времени после каждого цикла амплификации. Для количественного определения используют два метода — флюоресцентные красители, интеркалирующие в двуцепочечные молекулы ДНК, и модифицированные олигонуклеотиды (ДНК-зонды), которые флюоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК.

Часто ПЦР в реальном времени комбинируют с ОТ-ПЦР (обратная транскрипция) для измерения малых количеств мРНК, что позволяет исследователю получать количественную информацию о содержании данной мРНК в клетке и, соответственно, позволяет судить об уровне экспрессии данного гена в отдельной клетке или ткани[2].

Процедура очень похожа на процедуру классической ПЦР, то есть присутствуют все стадии реакции — плавление или денатурация двухцепочечных ДНК при температуре 95˚C, отжиг праймеров (температура отжига зависит от используемых праймеров) и элонгация при температуре 72˚С, если используется Taq-полимераза. Принцип ПЦР в реальном времени заключается в детекции ПЦР-продукта по мере его накопления. Сегодня это возможно сделать благодаря высокоспецифичным флуоресцентным зондам. Существует два основных подхода генерации света у таких зондов — во время элонгации и отжига, но, в обоих случаях флуоресценция усиливается с каждым новым циклом. Таким образом, сила сигнала говорит о первоначальном количестве интересующей молекулы[3].

На начальных этапах флуоресценция слабая, так как продукта ещё не очень много, поэтому её трудно отличить от фона. По мере накопления продукта, сигнал растёт сначала экспоненциально, а затем выходит на плато. Выход на плато объясняется нехваткой того или иного компонента реакции — могут закончиться праймеры, нуклеотидилтрифосфаты, метка. Если продукта реакции накопилось слишком много, то лимитирующим фактором может стать фермент, и тогда зависимость количества продукта от цикла станет линейной. Стоит отметить, что в стандартной реакции ПЦР в реальном времени все образцы выйдут на плато и достигнут примерно одного уровня сигнала. Таким образом, конечная точка ничего не скажет о начальном количестве исследуемого образца. С другой стороны, в экспоненциальной фазе можно проследить отличия в скорости роста продукта. Различия в начальном количестве молекул влияют на количество циклов, необходимых для поднятия уровня флуоресценции выше уровня шума[4].

Количество циклов, необходимое для того, чтобы флуоресценция достигла порогового уровня (над шумом) называется СТ-величиной. Пороговый уровень — не строго определённая величина, может подбираться для каждого случая отдельно.

Однако СТ-величина может зависеть от многих случайных факторов, например чувствительности детектора, качество фильтра и так далее. Поэтому точно начальное количество интересующего продукта померить нельзя. Для решения этой проблемы существуют методы нормировки. Измеряют отношение количеств двух молекул в пробе. Нормируют обычно на продукты генов домашнего хозяйства — таких генов, количество которых в клетке всегда примерно одинаковое (Пример — ген infA, кодирующий фактор инициации трансляции у бактерий). Соотношение определяют по следующей формуле: [N0 ]A/[N0 ]B = (1+E)(CTB-CTA)

Где [N0 ]A и [N0 ]B — начальные количества двух образцов, CTB и CTА — соответствующие CT-величины, а E — эффективность ПЦР, которая часто приравнивается к 1 или 0.9[4].

Разнообразие зондов[править | править код]

Мечение двуцепочечной ДНК[править | править код]

В данном случае меткой служит химическое соединение, способное интеркалировать в двойную спираль ДНК. Такой зонд меняет свою конформацию при взаимодействии с продуктами ПЦР и становится флуорофором. Детекцию можно проводить в конце каждого цикла, перед стадией денатурации. Примером такой краски может служить широко используемый SYBR Green.

Метка, работающая в фазу элонгации[править | править код]

Существует другой способ использования зондов, к которым с 5’ и 3’ концов пришиты флуорофор и его гаситель. Если последовательность зонда не очень длинная, то даже в связанном с ДНК состоянии два химических реагента будут взаимодействовать друг с другом, и не будет испускаться флуоресценция. Во время элонгации ДНК полимераза, обладающая 5’-3’-экзонуклеазной активностью, по одному нуклеотиду диссоциирует зонд от ДНК-мишени. В результате этого процесса и флуорофор и его гаситель попадут в раствор, где вероятность нахождения этих веществ рядом будет небольшой, и флуоресценция восстановится[3].

Метки, работающие в фазу отжига[править | править код]
Флуорогенная шпилька[править | править код]

Флуорогенная шпилька — небольшая одноцепочечная молекула ДНК, которая в свободном состоянии способна образовывать [пространственную структуру| вторичная структура ДНК] — шпильку. На один конец цепочки пришивают флуорофор, а на второй — вещество, его гасящее. Последовательность зонда комплементарна ДНК-мишени, которую нужно детектировать. В таком случае те молекулы зонда, которые плавают в растворе, не будут давать флуоресцентный сигнал, а связавшиеся с молекулами ДНК будут претерпевать конформационные изменения, в результате которых произойдет пространственное разнесение флуроофора и его гасителя и восстановление флуоресценции. Детекцию целесообразно проводить после денатурации[3].

Метка, основанная на методе FRET[править | править код]

Другой вариант мечения вновь-образующегося ПЦР-продукта основывается на методе FRET. Основа этого метода — наличие двух зондов, которые связываются с ДНК-мишенью на небольшом расстоянии друг от друга. На 5’-конец одного зонда и 3’-конец второго пришиты флуорофор-донор и флуорофор-акцептор соответственно. При их близком расположении происходит следующее: флуорофор-донор поглощает свет определённой длины волны и испускает свечение в более длинноволновом спектре. Эту волну, в свою очередь, поглощает флуорофор-акцептор и испускает свет, который можно детектировать[3].

Можно также использовать несколько зондов, у которых флуорофоры имеют разные спектры испускания. В таком случае появляется возможность в одной пробирке детектировать сигнал от разных молекул ДНК. Метод носит название множественный ПЦР (multiplex PCR).

ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции[править | править код]

Метод был изобретён для детекции количества ДНК в пробе, однако, последнее время все чаще используется немного видоизменённый количественный ПЦР для детекции РНК. Метод носит название ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции (ОТ-кПЦР , RT-qPCR). Этот метод широко используется для характеризации или сравнения уровней мРНК в разных популяциях[5].

Прежде, чем проводить стандартный ПЦР в реальном времени, нужно провести реакцию обратной транскрипции, для синтеза кДНК. Реакция обратной транскрипции проводится с помощью фермента — обратной-транскриптазы (РНК-зависимой ДНК полимеразы, ревертазы). Реакцию можно проводить без добавления праймера, однако наибольшая эффективность достигается, когда праймер добавлен. Существует три основных типа праймеров:

  1. Олиго dT праймеры — гибридизуются с polyA последовательностью, которая есть на 3’ -конце многих эукариотических мРНК.
  2. Случайная последовательность. Обычно используют либо гексамеры, либо нонамеры. Такие последовательности могут транскрибировать все мРНК
  3. Ген-специфичные праймеры используются, когда исследуется мРНК, экспрессируемая с определённого гена[4].

Реакция обратной транскрипции — ключевой этап в данном подходе, так как количество кДНК должно соответствовать количеству изучаемой мРНК. РНК-молекула менее стабильна, чем ДНК, поэтому при выделении РНК и проведении ОТ-кПЦР нужно тщательно следить за чистотой процедур и не допускать попадания большого количества РНКаз.

Полуколичественная ПЦР[править | править код]

Полуколичественная ПЦР (semi-quantitative PCR) — немного модифицированный метод количественного ПЦР с реакцией обратной транскрипции. Он часто используется для сравнения экспрессии нескольких генов. В данном случае измеряют количество накопленного продукта только в одной точке — после остановки реакции. ПЦР реакция останавливается, когда предполагается, что накопление продукта находится в экспоненциальной фазе роста и ПЦР-продукт можно детектировать. Далее, после электрофореза или саузерн-блота, можно измерить разницу в экспрессии нескольких образцов[5]. Использование данного метода критикуется в профессиональной среде, т.к. данный метод подразумевает оценку "на глазок".

ПЦР в реальном времени широко используется для решения многих исследовательских задач в лабораториях. Кроме того, этот метод нашёл применение в медицине (для диагностики заболеваний) и в сфере биотехнологий (для определения содержания микроорганизмов в продуктах питания и растительных материалах; для детекции ГМО). Также кПЦР используется для генотипирования вирусов и других патогенов человека и определения их количественного содержания.

Диагностические исследования[править | править код]

Количественная ПЦР применяется для быстрого выявления генов или фрагментов ДНК, являющихся маркерами инфекционных заболеваний, генетических отклонений и т. д. Внедрение этого метода в клинические лаборатории значительно улучшило качество диагностики инфекционных заболеваний[6]. Кроме того, кПЦР используется в качестве инструмента для детектирования вновь возникающих заболеваний. Например, новых штаммов гриппа[7].

Использование кПЦР также позволяет проводить количественные измерения и генотипирование (характеристика штаммов) вирусов, например, вируса гепатита B[8]. Степень инфекции, которая оценивается, как число копий вирусного генома на единицу ткани пациента, имеет большое значение во многих случаях. Например, вероятность реактивации вируса простого герпеса типа 1 зависит от количества инфицированных ганглиев[9]. В зависимости от того, интегрировал ли вирус в геном пациента (как, например, в случае вируса папилломы человека) или нет, количественный анализ осуществляется с применением обратной транскрипции или без неё.

Количественная ПЦР также широко используется для детекции опухолевых клеток в материале из со́лидных опухолей[10][11] и даже при некоторых формах лейкемии[12][13].

Выявление циркулирующих опухолевых клеток[править | править код]

Рак молочной железы все ещё является наиболее частой причиной смерти среди раковых больных. Причём, часто смерть вызвана не только самой опухолью, но и возникшими метастазами. Сами метастазы возникают в результате того, что особенные клетки, способные к пролиферации, отделяются от опухоли, выходят в кровяное русло и вторично поселяются в какой-то части организма. Эти клетки называются циркулирующими стволовыми клетками (ЦСТ). Присутствие таких клеток в крови пациентов, больных раком молочной железы, как правило, связано с плохим прогнозом исхода терапии и выживаемости в целом, поэтому является очень важным диагностическим параметром. Но из-за очень низкого количества, выявление ЦСТ — является довольно трудной задачей. И кПЦР, как высокочувствительный метод, может быть использован для решения этой проблемы. Дело в том, что, как и все раковые клетки, ЦСТ имеют эпителиальной происхождение и, следовательно экспрессируют определённый набор генов, отличающийся от окружающих их клеток крови, имеющих мезенхимальное происхождение. Для применения этого метода необходимо определить набор генов-маркеров ЦСТ и оценить их уровень экспрессии[14].

В микробиологии[править | править код]

ПЦР в реальном времени также применяется для микробиологических работ в сфере безопасности продуктов питания, для оценки качества вод (питьевых и сточных) и в сфере здравоохранения[15]. Кроме того, данный метод используется для идентификации кишечной микрофлоры[16].

Научные исследования[править | править код]

В ходе проведения исследований, кПЦР в основном используется для проведения количественных измерений транскрипции генов. Данный метод широко применяется для оценки изменений во времени экспрессии определённого гена, например, в ответ на введение лекарственного средства или изменения условий окружающей среды . Он также используется для определения зиготности трансгенных животных, используемых в исследовании. Для решения некоторых задач данный метод специально модифицируется

кПЦР для определения количества малых ядрышковых РНК (мяРНК)[править | править код]

мяРНК отличаются по свойствам от мРНК тем, что имеют очень малую длину (около 22 нуклеотидов), не имеют консервативной последовательности на концах, при этом мяРНК одной популяции могут отличаться на один или несколько нуклеотидов. Для решения этих проблем используют подходы, основанные на добавлении небольшого участка ДНК (линкера) к кДНК в реакции обратной транскрипции. Затем проводится ПЦР в реальном времени стандартными способами с использованием праймеров, комплементарных линкеру[17].

ПЦР в реальном времени для измерения количества белка[править | править код]

Для измерения количества белка в клетке используют следующий подход:

  1. Создают два вида антител к целевому белку с пришитыми последовательностями ДНК таким образом, что при взаимодействии с белком, 3’ конец одной последовательности оказывается недалеко от 5’-конца второй ДНК последовательности.
  2. Получается, что каждой молекуле белка соответствует известная нам последовательность ДНК, количество которой потом можно анализировать с помощью классического кПЦР-анализа[18].

Обнаружение фитопатогенов[править | править код]

Агропромышленность стремится производить семена и рассаду, не содержащую патогенных микроорганизмов, с целью предотвращения экономических потерь и увеличения срока хранения. Поэтому были разработаны системы, позволяющие обнаружить небольшие количества ДНК фитофторы (Phytophthora ramorum), оомицетов и некоторых других патогенов, которые приводят к гибели дубов и других видов растений, в смеси с ДНК растения-хозяина. Возможность различить ДНК возбудителя и растения-хозяина основана на амплификации последовательностей ITS (internal transcribed spacer), внутренних транскрибируемых участков, расположенных в кодирующей области гена рибосомной РНК, которые характерны для каждого таксона[19].

Детекция генетически модифицированных организмов[править | править код]

кПЦР (с использованием обратной транскрипции) может быть использована для детекции ГМО (генетически модифицированных организмов), так как является более чувствительным по сравнению со многими другими методами. При этом специфические праймеры используются для амплификации промотора, терминатора или даже промежуточных последовательностей, используемых в процессе создания вектора. Так как процесс создания трансгенного растения обычно приводит к вставке более, чем одной копии трансгена, его количество также обычно оценивается с помощью кПЦР. При этом в качестве контроля используют растение, содержащее данный ген в единственном экземпляре[20][21].

  1. VanGuilder H. D., Vrana K. E., Freeman W. M. Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis (англ.) // Biotechniques (англ.)русск. : journal. — 2008. — Vol. 44. — P. 619—626. — doi:10.2144/000112776. — PMID 18474036.
  2. Nolan T., Hands R. E., Bustin S. A. Quantification of mRNA using real-time RT-PCR. (англ.) // Nat. Protoc. (англ.)русск. : journal. — 2006. — Vol. 1. — P. 1559—1582. — doi:10.1038/nprot.2006.236. — PMID 17406449.
  3. 1 2 3 4 Provenzano M., Mocellin S. Complementary techniques: validation of gene expression data by quantitative real time PCR. (англ.) // Advances In Experimental Medicine And Biology. — 2007. — Vol. 593. — P. 66—73. — doi:10.1007/978-0-387-39978-2_7. — PMID 17265717. [исправить]
  4. 1 2 3 Kubista M., Andrade J. M., Bengtsson M., Forootan A., Jonák J., Lind K., Sindelka R., Sjöback R., Sjögreen B., Strömbom L., Ståhlberg A., Zoric N. The real-time polymerase chain reaction. (англ.) // Molecular Aspects Of Medicine. — 2006. — April (vol. 27, no. 2-3). — P. 95—125. — doi:10.1016/j.mam.2005.12.007. — PMID 16460794. [исправить]
  5. 1 2 Bustin S. A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problems. (англ.) // Journal Of Molecular Endocrinology. — 2002. — August (vol. 29, no. 1). — P. 23—39. — PMID 12200227. [исправить]
  6. ↑ Sails AD (2009). «Applications in Clinical Microbiology». Real-Time PCR: Current Technology and Applications. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-39-4
  7. FDA Authorizes Emergency Use of Influenza Medicines, Diagnostic Test in Response to Swine Flu Outbreak in Humans. FDA News, April 27, 2009.
  8. Yeh S. H., Tsai C. Y., Kao J. H., Liu C. J., Kuo T. J., Lin M. W., Huang W. L., Lu S. F., Jih J., Chen D. S., Chen P. J. Quantification and genotyping of hepatitis B virus in a single reaction by real-time PCR and melting curve analysis. (англ.) // Journal Of Hepatology. — 2004. — October (vol. 41, no. 4). — P. 659—666. — doi:10.1016/j.jhep.2004.06.031. — PMID 15464248. [исправить]
  9. Sawtell N. M. The probability of in vivo reactivation of herpes simplex virus type 1 increases with the number of latently infected neurons in the ganglia. (англ.) // Journal Of Virology. — 1998. — August (vol. 72, no. 8). — P. 6888—6892. — PMID 9658140. [исправить]
  10. Cen P., Ni X., Yang J., Graham D. Y., Li M. Circulating tumor cells in the diagnosis and management of pancreatic cancer. (англ.) // Biochimica Et Biophysica Acta. — 2012. — December (vol. 1826, no. 2). — P. 350—356. — doi:10.1016/j.bbcan.2012.05.007. — PMID 22683404. [исправить]
  11. Young R., Pailler E., Billiot F., Drusch F., Barthelemy A., Oulhen M., Besse B., Soria J. C., Farace F., Vielh P. Circulating tumor cells in lung cancer. (англ.) // Acta Cytologica. — 2012. — Vol. 56, no. 6. — P. 655—660. — doi:10.1159/000345182. — PMID 23207444. [исправить]
  12. Brüggemann M., Gökbuget N., Kneba M. Acute lymphoblastic leukemia: monitoring minimal residual disease as a therapeutic principle. (англ.) // Seminars In Oncology. — 2012. — February (vol. 39, no. 1). — P. 47—57. — doi:10.1053/j.seminoncol.2011.11.009. — PMID 22289491. [исправить]
  13. DiNardo C. D., Luger S. M. Beyond morphology: minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia. (англ.) // Current Opinion In Hematology. — 2012. — March (vol. 19, no. 2). — P. 82—88. — doi:10.1097/MOH.0b013e3283501325. — PMID 22314322. [исправить]
  14. Andergassen U., Kölbl A. C., Hutter S., Friese K., Jeschke U. Detection of Circulating Tumour Cells from Blood of Breast Cancer Patients via RT-qPCR. (англ.) // Cancers. — 2013. — 25 September (vol. 5, no. 4). — P. 1212—1220. — doi:10.3390/cancers5041212. — PMID 24202442. [исправить]
  15. ↑ Filion, M (editor) (2012). Quantitative Real-time PCR in Applied Microbiology.Caister Academic Press. ISBN 978-1-908230-01-0.
  16. Nobre Giselle, S. Miglioranz Lucia Helena. Probiotics: The Effects on Human Health and Current Prospects (англ.) // Probiotics. — 2012. — 3 October. — ISBN 9789535107767. — doi:10.5772/50048. [исправить]
  17. Benes V., Castoldi M. Expression profiling of microRNA using real-time quantitative PCR, how to use it and what is available. (англ.) // Methods (San Diego, Calif.). — 2010. — April (vol. 50, no. 4). — P. 244—249. — doi:10.1016/j.ymeth.2010.01.026. — PMID 20109550. [исправить]
  18. Swartzman E., Shannon M., Lieu P., Chen S. M., Mooney C., Wei E., Kuykendall J., Tan R., Settineri T., Egry L., Ruff D. Expanding applications of protein analysis using proximity ligation and qPCR. (англ.) // Methods (San Diego, Calif.). — 2010. — April (vol. 50, no. 4). — P. 23—26. — doi:10.1016/j.ymeth.2010.01.024. — PMID 20215017. [исправить]
  19. Baldwin B. G. Phylogenetic utility of the internal transcribed spacers of nuclear ribosomal DNA in plants: an example from the compositae. (англ.) // Molecular Phylogenetics And Evolution. — 1992. — March (vol. 1, no. 1). — P. 3—16. — PMID 1342921. [исправить]
  20. Holst-Jensen A., Rønning S. B., Løvseth A., Berdal K. G. PCR technology for screening and quantification of genetically modified organisms (GMOs). (англ.) // Analytical And Bioanalytical Chemistry. — 2003. — April (vol. 375, no. 8). — P. 985—993. — doi:10.1007/s00216-003-1767-7. — PMID 12733008. [исправить]
  21. Brodmann P. D., Ilg E. C., Berthoud H., Herrmann A. Real-time quantitative polymerase chain reaction methods for four genetically modified maize varieties and maize DNA content in food. (англ.) // Journal Of AOAC International. — 2002. — May (vol. 85, no. 3). — P. 646—653. — PMID 12083257. [исправить]
  • Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. — Москва: Мир, 2002. — 589 с. — ISBN 5030033289.

ru.wikipedia.org

как проводят анализ, когда назначают.

Еще совсем недавно, каких-нибудь десять лет назад при диагностике заболеваний, передающихся половым путем, в ходу были простые и бюджетные методики лабораторных исследований.

Они якобы давали исчерпывающее представление о возбудителях половых инфекций и их наличии в организме человека.

Трихомонаду и гонококк было принято искать в мазках.

Окрашены они были самыми разными красителями под самым простым световым микроскопом.

Разве что лаборант мог плеснуть иммерсионного масла для лучшей подсветки.

Никого особо не смущало, что красители меняют форму и подвижность тех же трихомонад.

После чего отличить их от патологически измененной клетки эндотелия весьма проблематично.

Хламидий, вернее антитела к ним, титровали из крови.

Уреаплазмы и микоплазмы выращивали колониями на твердых и жидких средах, по неделе ожидая, пока колонии заколосятся.

В целом их считали условными патогенами.

И предпочитали не замечать, пока не расцветала клиника урогенитальной инфекции или не вставал вопрос о бесплодии.

Метод ПЦР диагностики стал революцией в лабораторном деле.

Раз и навсегда она решила проблему сжатых сроков диагностического поиска.

Максимально приблизила ответ на вопрос “Что вызвало воспаление?” к первому визиту пациента к специалисту.

Сегодня никого не надо заставлять дожидаться ответов анализов по неделе.

И с замиранием сердца готовиться к худшему, временно вместо антибактериального или противовирусного лечения принимая успокоительные.

Содержание статьи

  •  Суть метода ПЦР
  •  Спектр применения ПЦР анализа
  •  Сбор материала для ПЦР анализа
  •  Что делать перед ПЦР исследованием
  •  Какие врачи берут ПЦР-анализы
  • Кому и когда необходим ПЦР анализ
  •  Особенности ПЦР диагностики
  •  ПЦР-диагностика: расшифровка
  •  Плюсы и минусы анализа ПЦР
  •  Вариации ПЦР методики
  •  Что означает ответ в бланке ПЦР

 Суть метода ПЦР

Если доступно отвечать на вопрос “ПЦР-анализ, что это такое?”, — то придется вспомнить следующее.

Всякое живое существо несет в себе наследственную информацию, которую получает от родителей и передает детям.

Это либо РНК (рибоксинуклеиновая кислота), либо ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота).

Либо и то, и другое, в одном существе в разных вариантах.

РНК – это одна цепочка нуклеиновых кислот, ДНК – две.

Собственно, вот эти цепочки или их обломки и ищут, когда ведется ПЦР-диагностика инфекций.

  • Так как генетический код уникален для разных видов инфекционных агентов, попасть впросак, как при световой микроскопии, то есть, принять один вид паразита за другой не представляется возможным. Такая точность называется сто процентной специфичностью.
  • Второй критерий, подтверждающий точность диагностики, – это чувствительность ПЦР-анализа. Она тоже не подкачала и составляет сто процентов.

По сути, этот параметр показывает, сколько микробов или вирусов, или их фрагментов должно попасть в образец для исследования, чтобы анализ мог отреагировать на их присутствие.

Когда проводят ПЦР-диагностику, для успешности достаточно даже обломков наследственного материала.

Это позволяет зафиксировать присутствие возбудителя в крови даже в прошлом (до полугода от того момента, как лекарства успешно справились с заразой).

Это делает ПЦР уникальным ретроспективным методом.

Для оценки ранее существовавших, но уже утраченных поводов для воспалений, с последствиями которых приходится иметь дело клиницистам (например, бесплодием).

То есть имеется бесплодная пара и все еще не ясно, в чем заключается причина проблемы.

На данный момент оба клинически здоровы, за исключением, скажем, изменений в спермограмме у мужчины.

С помощью ПЦР можно установить, какие именно инфекции присутствовали в организме мужчины за последние полгода и предположить, что именно они стали камнем преткновения.

 Спектр применения ПЦР анализа

Какие инфекции можно проверить ПЦР-анализом?

Да практически любые.

Острые, хронические, рецидивирующие, даже ранее существовавшие.

Бактериальные, грибковые, вирусные, протозойные.

Любой инфекционный агент, имеющий геном, можно засечь методом амплификации нуклеиновых кислот.

В половых и мочевыводящих путях, ухе, горле, носу, дыхательной системе, ЖКТ.

С любого участка тела, с которого удастся получить образец клеток.

Это дает методике очень широкий спектр применения.

Что касается забора образцов для исследования, пожеланием врачей-лаборантов остается предоставление тех тканей, в которых подозревается наличие возбудителя.

Хотя кровь и продолжает считаться универсальным материалом для анализа, не стоит пренебрегать исследованиями того, что получено непосредственно с “места событий”.

  • Если воспаление развивается в уретре или вышележащих мочевых путях предпочтительны соскобы эндотелия из нее или моча.
  • При наличии вульвита – соскоб влагалищного эндотелия, цервицита – слизистой из шеечного канала.
  • Можно подвергнуть анализу простатический секрет, сперму, соскобы из прямой кишки, отделяемое конъюнктивы глаз, соскобы и мазки из ротоглотки, спинномозговую жидкость. И это только в урологии и гинекологии.
  • Реакцию используют во фтизиатрии для верификации возбудителей нетипичных пневмоний и туберкулеза.

Исследование может проводиться в день первого обращения к врачу, если будет произведен забор образцов.

Ответы выдаются в течение первых двух суток.

При необходимости в течение нескольких часов.

Таким образом, метод — экспресс-диагностика, сильно сокращающая сроки лечения и ускоряющая его начало.

 Сбор материала для ПЦР анализа

Стандартно выполняются соскобы и мазки у женщин на гинекологическом кресле.

У мужчин при урологическом осмотре.

Чаще всего это все же соскоб эндотелиальных клеток мочевыводящих путей.

При отсутствии воспалительных изменений болей при манипуляции нет.

Воспаленные слизистые более подвержены микротравмам и могут давать незначительные контактные кровотечения.

С ними ничего не нужно делать, проходят самостоятельно за несколько часов или суток.

Для женщин сначала выполняется забор проб из уретры, затем из влагалища и наконец из шеечного канала.

  • Цервикальный материал забирается тампоном-щеточкой или стандартным ватным тампоном, с которого пробу переносят в пробирку с транспортной средой.
  • Из уретры забор предусмотрен тампоном или бактериологической петлей из пластика.

Они вводятся на пару сантиметров и вынимаются с легким нажимом на стенки уретры.

Полученный образец также переносится в пробирку.

  • Соскоб из влагалища берется с использованием стерильного ватного тампона. При выборе участков забора образца предпочтение отдается измененной слизистой или заднему своду влагалища.

У мужчин соскоб предполагает использование урологического зонда.

Он вводится в мочеиспускательный канал на глубину 3-4 сантиметра и вынимается с легким нажатием на стенки уретры.

Образцы других биологических жидкостей и тканей берутся в лаборатории или на приеме у профильного специалиста.

  • Венозная кровь натощак утром или после шестичасового голодного промежутка в процедурном кабинете.
  • Сперма – в лаборатории собирается пациентом.
  • Мазки из прямой кишки, ротоглотки, отделяемое конъюнктивы – средним мед персоналом на приеме у врача.
  • Простатический секрет – на приеме у уролога после массажа простаты.
  • Для мочи предусмотрен сбор утренней порции в объеме 30-50 миллилитров после гигиенического туалета половых органов.
  • Мокрота собирается утром после питья небольшого количества теплой жидкости при отхаркивании в стерильную аптечную емкость.
  • Спинномозговая жидкость (ликвор) – при проведении пункции.

 Что делать перед ПЦР исследованием

Очень часто у пациентов клиник и лабораторий возникает масса вопросов по поводу того, как готовиться, ПЦР-анализ требует ли специальных мероприятий от пациента.

Чтобы исследование стало максимально достоверным, желательно соблюдение некоторых условий.

Подготовка к ПЦР крови и мазка включает следующие пункты.

  • За две недели не должны употребляться антибактериальные, противовирусные и противопротозойные лекарственные средства.
  • Перед тем, как берется мазок на ПЦР анализ, исключаются антисептики для местного применения. В том числе, в средствах для интимной гигиены.
  • Перед забором материала из мочеиспускательного канала следует не мочиться 2-3 часа до мероприятия.
  • Перед забором крови нельзя употреблять пищу, по крайней мере, на протяжении шести часов.
  • Перед исследованием эякулята секс противопоказан двое суток.

 Какие врачи берут ПЦР-анализы

Обычно это гинеколог, уролог и венеролог.

То есть специалисты, которым требуется чаще других сталкиваться со скрытыми вариантами или носительством инфекций, лечение которых нужно начинать как можно скорее.

Не менее редко в ПЦР нуждаются инфекционисты.

Особенно в случаях внутриутробных инфекций или других инфекционных процессах невыясненной этиологии.

Сколько по времени делается ПЦР-анализ, зависит от возможностей лаборатории и срочности, с которой нужно получить ответ.

Обычно это не более трех рабочих дней.

Кому и когда необходим ПЦР анализ

Стандартными ситуациями, требующими применения данного обследования, становятся:

  • Выявление при клиническом осмотре или в жалобах пациента признаков островоспалительных изменений мочеполового тракта.
  • Для верификации причины воспалительных явлений.
  • У пациентов с бесплодием для уточнения причин.
  • В ходе планирования беременности.
  • Во время наступившей беременности для женщин.
  • Планирование экстракорпорального оплодотворения.
  • Необходимость проконтролировать эффективность терапии венерического заболевания или носительства возбудителя ИППП (по истечении месяца от окончания терапевтического курса).
  • Необходимость первичного обследования для тех, у кого за последний год было два и более сексуальных партнеров. Подобный скрининг нацелен на выявление скрытых инфекций.

 Особенности ПЦР диагностики

Проявляемая анализом высокая чувствительность к половым инфекциям позволяет работать методикой при разных видах возбудителей.

Лучше всего выявляются уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, а также вирусы папилломы, герпеса, гепатитов, ВИЧ, цитомегаловирус.

Есть возможность применить диагностическую тактику сразу после заражения.

В ходе исследования амплификатор периодически нагревает и охлаждает образцы с добавленными ферментами-ускорителями в пробирках.

На первом этапе расщепляют двойную цепочку ДНК искомого возбудителя.

Затем на ее короткий участок садятся два праймера (затравки) из стандартного набора, уникальные для данного возбудителя.

Для образования гибрида между матричной ДНК и праймером требуется повысить температуру.

После этого происходит удвоение участков ДНК инфекционного агента и их выделение электрофорезом и выявление.

В дальнейшем участок можно изучать и типировать.

Методика незаменима в ситуациях, когда возбудители не поддаются культуральному выращиванию, ускользают от серодиагностики.

Цена мазка и крови может несколько отличаться в разных клиниках и лабораториях.

Целесообразно, чтобы забор материала проводился в клинике, оснащенной лабораторными мощностями.

Это позволяет ограничить загрязнение образцов посторонними микробными примесями.

 ПЦР-диагностика: расшифровка

Анализ совмещает в себе достоинства качественного и количественного теста.

Качественные характеристики отражают в бланке отметками “не обнаружено”.

То есть ответ отрицательный

Или “обнаружено” при положительной пробе.

  • Отрицательному ответу соответствует ситуация, когда нет даже намеков на удвоение нуклеиновых цепочек даже при стимуляции ферментами-ускорителями. Это происходит, когда РНК или ДНК, характерные для искомого возбудителя, отсутствуют либо их количество находится за порогом чувствительности теста.
  • Положительные результаты приходят, если имеется разгар клинических проявлений инфекционного процесса или носительство инфекционного агента. После лечения половой инфекции положительный результат регистрируется на протяжении первых девяти месяцев в среднем (могут быть сокращения сроков до трех или удлинение до двенадцати месяцев).

Ложноотрицательный и ложноположительный анализ тоже возможны.

Сразу после лечения и в течение шести-девяти месяцев после его окончания диагностика может свидетельствовать о присутствии генетической информации возбудителя в крови или других средах и тканях организма.

По истечении указанного срока анализ становится отрицательным.

 Плюсы и минусы анализа ПЦР

  • Достоинством методики является то, что в отличие от культуральных методов исследования, для выявления инфекции не требуется накопления агентов в организме. А в отличие от серологических анализов крови нет необходимости выжидать выработки антител к антигенам бактерий, вирусов, грибов или простейших. От момента заражения можно проводить тестирование. Идеальным можно считать ситуацию, когда интерпретация результатов проводится в день обращения к врачу. ПЦР выигрывает сравнение с ИФА и посевом по всем показателям, кроме одного: способности принимать прошлую инфекцию за настоящую в связи с высокой чувствительностью.
  • Погрешности методики, приводящие к ложным результатам, в основном завязаны на неправильный выбор биологических образцов, удаленных от места воспалительных изменений или загрязнением их посторонней инфекцией в процессе забора или транспортировки, нельзя полностью полагаться на диагностику крови. Для половых инфекций предпочтительнее исследовать соскобы урогенитального эпителия.
  • Еще одним аспектом становятся погрешности на этапе выполнения лабораторного этапа: старое оборудование, недостаточная квалификация персонала.
  • Поэтому всегда предпочтительнее выбирать для исследования клинику с репутацией. Оснащенную современным оборудованием и расходниками и совмещающую в себе консультативный прием специалистов и лабораторные мощности.

 Вариации ПЦР методики

Существуют различные модификации полимеразной цепной реакции, направленные на улучшение результативности.

    • Количественная проводится с использованием маркеров ДНК (зондов), которые в реальном времени позволяют подсчитать количество полученного в результате анализа продукта. Участки ДНК, исполняющие роль зонда, иногда заменяют флуоресцирующим красителем, который сильнее светится на меченых участках, удваивающихся ДНК.
    • Вариант молекулярных колоний задействует акриламидный гель, благодаря которому образуются молекулярные колонии в точках, где есть искомые ДНК.
    • Ступенчатая ПЦР позволяет избегать неспецифичного связывания фрагментов ДНК.
    • RAPD используют, когда исследуемый материал может содержать сходные геномы близкородственных организмов и их требуется различить.
    • Вложенная позволяет с помощью двух пар праймеров провести две реакции, удвоив не только первичную матрицу, но и продукты ее амплификации.

Выбор методик обусловлен в лабораториях и клиниках обычно не только диагностическими потребностями, но и существующими возможностями.

То есть наличием или отсутствием расходных материалов, используемых в различных модификациях исследований.

 Что означает ответ в бланке ПЦР

Отправляясь на обследование, проходя его или получая ответ анализа на руки, не нужно думать, что результат автоматически равняется диагнозу.

Целый ряд обстоятельств может сопровождать присутствие в организме инфекционного агента.

ПЦР определяет не только живой, но и погибший после медикаментозного лечения биологический материал.

Правильно расшифровать и истолковать данные анализов может только грамотный врач-клиницист.

Нельзя пренебрегать полноценной консультацией, лишь обратившись в лабораторию и выполнив исследование.

Каждое заболевание требует полноценного подхода: поиска его причины, разработки тактики лечения и достижения результатов.

Максимально коротким этот путь становится только при содействии врача.

Он в состоянии не только подобрать лечение, но и провести его коррекцию в случае необходимости, а также проконтролировать результаты и эффективность терапии.

Большой процент половых инфекций существует в скрытых, хронических формах или объединяется с другими представителями соей группы.

Хламидиям могут сопутствовать трихомонады и гонококки, гепатитам — ВИЧ и туберкулез, герпесу — папилломавирус.

Даже скудная симптоматика хронических инфекционных процессов или ее отсутствие – не гарантия латентного периода инфицирования или отсутствия позднейших осложнений.

Попытки отмахнуться от проблемы или сэкономить на ее решении часто оборачиваются не только лишними затратами времени и денежных средств.

Но и потерями репродуктивных возможностей и сексуального здоровья.

Рационально выбирая врача, а не только клинику и лабораторию, вы решаете задачу сохранения здоровья максимально эффективно.

При необходимости сдать ПЦР анализ обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

onvenerolog.ru

Полимеразная цепная реакция (ПЦР анализ): описание метода, диагностика

ПЦР анализ, или полимеразная цепная реакция, — метод ДНК — диагностики, основанный на многократном увеличении молекул ДНК и РНК, характерных для того или иного патогенного микроорганизма. Для увеличения скорости копирования нуклеиновых кислот используются ДНК и РНК ферменты.

ДНК — диагностика: ПЦР анализ, достоинства метода

ДНК — диагностика — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования в лабораторной диагностике.

  • Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, позволяет выявить в организме человека многие инфекционные заболевания, которые были вызваны вирусами  или возбудителями бактериальной природы.
  • С помощью данного анализа можно обнаружить болезни не только в острой стадии, но и во время инкубационного (скрытого) периода.

Данный метод исследования обладает многими преимуществами:

  • Возможность обнаружить конкретного возбудителя и целого ряда микроорганизмов;
  • Высокая точность: вероятность ложных результатов ничтожно мала;
  • Диагностика скрытых, вяло текущих заболеваний, не беспокоящих какими-либо проявлениями;
  • Быстрое получение результатов;
  • Использование биологического материала различного рода: крови, плазмы, сыворотки крови, мочи, кала, биологических  жидкостей, мокроты, слизи, выделений;
  • ПЦР анализ может быть качественный и количественный, то есть, не только выявлять вид возбудителя болезни, но и давать информацию о его количественном содержании в организме.

Описание, анализ крови методом ПЦР 

Одним из самых распространенных видов исследования является анализ крови методом полимеразной цепной реакции, ПЦР;

  • Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач.
  • В устоявшейся клинической практике ПЦР  анализы обычно сдают блоками, на определенные группы конкретных возбудителей. Например:

ПЦР — диагностика инфекций, передающихся половым путем, где одновременно выявляются:

ПЦР — диагностика бактериальных инфекций:

ПЦР — диагностика  вирусных инфекций,   ( вирусных гепатитов, герпеса и других ).

ПЦР — диагностика острых кишечных и респираторных инфекций, коронавируса.

Другие анализы методом ПЦР

Для данного анализа можно исследовать ряд других жидкостей организма: например, сок простаты, плевральную жидкость, спинномозговую, околоплодную, суставную, слюну и др..

  • Исследование практически не имеет отличий от анализа крови.
  • Происходит клонирование фрагментов нуклеиновых кислот различных возбудителей, методом полимеразной цепной реакции, ПЦР.
  •  На основе полученного результата специалисты делают вывод о наличии у человека какого-либо заболевания.

Полимеразная цепная реакция, анализ кала

Услышав жалобы на понос, рвоту, боли в животе, лечащий врач может направить клиента на сдачу ПЦР анализа кала.

  • На данный метод исследования затрачивается сравнительно небольшой промежуток времени.
  • Результаты пациент узнает уже через несколько часов.
  • Основными рекомендациями для получения достоверного результата является стерильность контейнера, в который будет помещен биологический материал,
  • а также исключение использования медикаментов, способных повлиять на работу кишечника или изменить окрашивание кала.

Проведение анализа мочи на ПЦР

  • Выявление инфекций, передающихся половым путем, чаще всего осуществляется посредством ПЦР исследования мочи.
  • Этот метод позволяет диагностировать, к примеру, вирус иммунодефицита человека, наличие в организме микроорганизмов рода Кандида.
  • Главным условием сдачи ПЦР анализа мочи является воздержание от половых контактов.
  • Женщинам также не следует сдавать мочу во время менструации.

Видео, ПЦР, полимеразная цепная реакция

Диагностика вирусных и бактериальных инфекций методом ПЦР

ПЦР диагностика позволяет выявить в организме наличие следующих инфекций:

  • Туберкулез;
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • Токсоплазмоз;
  • Листериоз;
  • Опоясывающий лишай;
  • Цитомегаловирус;
  • Хламидиоз;
  • Клещевой энцефалит и многие другие;
  • При помощи ПЦР возможна диагностика вирусных гепатитов.
  • ВИЧ, вирус иммунодефицита человека, также может быть диагностирован посредством ПЦР теста.
  •  Данный метод обследования используется, например, для обнаружения ВИЧ у ребенка зараженной матери.

Высокая точность анализа ПЦР

Степень достоверности результата зачастую зависит от подготовки пациента.

  • Результат проведенного исследования всегда однозначен: либо отрицателен, либо положителен.
  • Но специалист не может поставить точный диагноз, руководствуясь только результатом теста ПЦР.
  • Он используется в качестве дополнительного обследования.
  • Для анализа крови методом ПЦР используется кровь, взятая из вены.

  • Причем, в случае, когда полимеразная цепная реакция проводится на ранних стадиях заболевания, есть вероятность ложноотрицательного результата.
  • Тогда необходимо повторное проведение процедуры через определенный период.

ПЦР анализ на ВИЧ и вирус герпеса

  • Методом ПЦР можно определить наличие ВИЧ-инфекции в организме.
  • Наличие ВИЧ — инфекции  также является одним из условий, при которых необходима сдача ПЦР анализа на вирус герпеса.
  • Обследование поможет обнаружить вирусную нуклеиновую кислоту за небольшой промежуток времени.
  • Для проведения исследования дополнительно может использоваться такой биологический материал, как мазок из уретры.
  • Перед процедурой отбора пациенту следует воздержаться от мочеиспускания в течение нескольких часов.

Диагностика туберкулеза методом ПЦР

Туберкулез также можно выявить по результатам анализа крови методом ПЦР.

  • Лечащие врачи дают пациентам направление на данное обследование для уточнения диагноза в спорных случаях.

Когда показан анализ ПЦР при беременности

  • ПЦР анализ как метод, используемый для диагностики огромного количества болезней, является обязательным для женщины во время беременности.
  • Обследование проводится для того, чтобы понять, имеет ли место угроза для нормального развития плода.
  • Обследование такого рода может быть назначено как в виде плановой процедуры, так и в случае, когда имеется подозрение на наличие каких-либо заболеваний.
  • Специалист может по результатам полимеразной цепной реакции сделать вывод о развитии определенных патологий в организме беременной женщины, а также о риске заражения плода.

Видео, ПЦР анализ на инфекции, зачем сдавать

Подготовка к проведению ПЦР анализа

Для максимально точного результата исследования клиент должен подготовиться процедуре отбора биологического материала. Среди рекомендаций по подготовке к сдаче крови выделяют:

  • Исключение тяжелых физических нагрузок;
  • Употребление «правильной» пищи (отсутствие в рационе алкоголя и жирной пищи).

Для продуктивной сдачи мочи необходимо:

  • Использовать стерильный контейнер для переноса жидкости;
  • Отбирать биологический материал утром, сразу после пробуждения;
  • Воздержаться от половых связей за несколько дней до процедуры.

Подготовка к отбору мазка включает в себя:

  • Гигиену половых органов с помощью обычной проточной воды, при отсутствии ароматных моющих средств;
  • Воздержание от мочеиспускания за некоторое время до сдачи биологического материала.

Видео, полимеразная цепная реакция в картинках

Навигатор по сайту

Общий анализ крови

Анализы, которые покажут рак

Генетические анализы

Биохимические анализы, когда они нужны

Анализы на гормоны

Самые точные анализы на инфекции и на паразитов

Иммуноферментные анализы в диагностике 

analyzekrovi.ru

сферы применения, подготовка к исследованию, анализы на инфекции

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).

Принцип ПЦР- исследования

У каждого живого существа, по крайней мере, на нашей планете, есть уникальный «отпечаток» - ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), которая отвечает за передачу наследственных факторов от предков к потомкам. Структурно эта молекула представляет собой две нити из молекул-азотитых оснований, удерживаемые рядом друг с другом химическими связями и скрученные в спираль (считается, что для компактности). Из курса биологии вы можете помнить такие названия, как аденин (А), гуанин (Г), тимидин (Т) и цитозин (ц). Это 4 нуклеотида, которые и создают последовательность ДНК. Вирусы хранят свою генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте – РНК.
Информация об уже изученных ДНК и РНК хранится в научных базах лабораторий. После того, как был изобретен метод ПЦР, для многих возбудителей различных заболеваний (бактерии, грибки и вирусы) были созданы свои специфические генетические детекторы (праймеры) - уникальные последовательности нуклеотидов, характерных только для конкретного возбудителя. И если поместить их в пробирку с исследуемым материалом, при наличии в нем ДНК или РНК «живых» возбудителей, праймеры запускают реакцию репликации – создания огромного числа копий, которое можно идентифицировать визуально. Т.е. они начинают копировать свою ДНК/РНК десятки раз.
И при подсчете результатов сотрудники лаборатории могут понять, есть ли искомые бактерии и вирусы в исследуемом образце, или нет, именно поэтому результаты ПЦР чаще всего качественные, т.е. «обнаружено» или «не обнаружено».

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Как это все происходит в лаборатории


Выделение ДНК

Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата.
Амплификация (увеличение числа копий ДНК)
Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация.
Денатурация
Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C.
Отжиг
Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами - изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки.
Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

  1. Электрофорез в вязкой среде. Суть в том, что ДНК/РНК заряжены электрически и движутся к одному из электродов. В среду (агар или полиакридный гель) добавляют краситель ДНК (например – бромистый этидий). В процессе сеанса электрофореза, молекулы нуклеиновых кислот движутся и формируют скопления, подкрашенные этидием. Под ультрафиолетом, это выглядит в виде полосок разной толщины и яркости.
  2. Метод гибридизации. Используются праймеры, заранее помеченные люминофором (флуорофором). После нужного числа температурных циклов, применяют специальный прибор – детектор флюоресценции. За счет того, что в образец можно добавлять флуорофоры для разных мишеней (они будут и светиться под ультрафиолетом разным цветом), метод гибридизации подходит для диагностики сразу нескольких мишеней в одном образце.
  3. ПЦР диагностика в реальном времени (real-time PCR). Отличается тем, что детекция проводится прямо в процессе амплификации. Для этого нужны зонды-люминофоры (из предыдущего пункта) и специальные приборы ДНК-амплификаторы. Эти устройства оценивают нарастание яркости люминофора после каждого температурного цикла и впоследствии, вычисляют исходное число искомых нуклеиновых кислот в образце.
Электрофорез и гибридизация подходят только для качественной оценки, то есть дают ответ на вопрос, есть ли в образце искомый материал. ПЦР в реальном времени – единственный доступный метод количественной оценки.
Если мишеней для праймеров в образце не окажется, то температурные циклы пройдут в холостую и при детекции будет получен отрицательный результат.

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).


Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

пцр диагностика на Инфекции:

www.labquest.ru

ПЦР анализ

Название исследования Клинический материал Результат Срок испол. Цена
Хламидии
ДНК Chlamydia trachomatis соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, синовиальная жидкость кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Chlamydia trachomatis соскоб урогенит. тракта,  моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 560,00р.
Микоплазмы
ДНК Mycoplasma hominis соскоб из урогенит. тракта секрет простаты, сперма, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Mycoplasma hominis соскоб из урогенитального тракта кол. 3 р.д. 360,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium соскоб урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 560,00р.
Уреаплазмы
ДНК U.urealyticum / U. parvum соскоб из урогенит. тракта, моча, секр. простаты, сперма кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК U.urealyticum / U. parvum соскоб урогенит. тракта кол. 3 р.д. 420,00р.
Гарднереллы
ДНК Gardnerella vaginalis соскоб из урогенит. тракта кач. 2 р.д. 190,00р.
Трепонемы
ДНК Treponema pallidum соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты кач. 2 р.д. 190,00р.
Нейссерии
ДНК Neisseria gonorrhoeae соскоб из урогенит. тракта, моча, секрет простаты, сперма кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Neisseria gonorrhoeae соскоб из урогенитального тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 630,00р.
Микобактерии
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex секрет простаты, сперма, моча, мокрота, СМЖ, БАЛ, ПЖ, синовиальная жидкость кач. 2 р.д. 290,00р.
Стрептококки группы А
ДНК Streptococcus pyogenes (Стрептококки группы А) мазок из ротоглотки кач. 2 р.д. 290,00р.
Стрептококки группы В
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) соскоб из урогенитального тракта, моча кол. 2-3 р.д. 260,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) кровь с ЭДТА кол. 3 р.д. 630,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ, СМЖ кол. 3 р.д. 630,00р.
Листерии
ДНК Listeria monocytogenes СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes кал кач. 3 р.д. 440,00р.
ДНК Bordetella pertussis/parapertussis/bronchiseptica мазок из носа/зева, аспират, мокрота, БАЛ кач. 3 р.д. 1260,00р.
ДНК Campylobacter species кал кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК Salmonella species кал кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК Shigella + E. coli (энтероинвазивные штаммы) кал кач. 4 р.д. 760,00р.
ДНК Salmonella/Shigella / Campylobacter / Adenovirus кал кач. 3 р.д. 830,00р.
РНК Rotavirus / Astrovirus / Norovirus / Enterovirus кал кач. 3 р.д. 950,00р.
Диарогенные эшерихиозы кал кач. 3 р.д. 730,00р.
Кандида
ДНК Candida albicans соскоб из урогенит. тракта кач. 2 р.д. 190,00р.
Токсоплазма
ДНК Toxoplasma gondii СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 390,00р.
ДНК Toxoplasma gondii кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 390,00р.
Трихомонады
ДНК Trichomonas vaginalis соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Trichomonas vaginalis соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 390,00р.
Пневмоцисты
ДНК Pneumocystis jirovecii (carinni) мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ кач. 3 р.д. 320,00р.
Гепатит A
РНК HAV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
Гепатит В
ДНК HBV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА кол. 7 р.д. 1420,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА ген. 10 р.д 1160,00р.
ДНК вируса гепатита В (ДНК HBV), ультрачувствительный метод кровь с ЭДТА кач. 10 р.д 2100,00р.
Гепатит С
РНК HCV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
РНК HCV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
РНК HCV кровь с ЭДТА кол. 7 р.д. 1950,00р.
РНК HCV (типы 1,2,3) кровь с ЭДТА ген. 4 р.д 800,00р.
РНК HCV (типы 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5, 6) кровь с ЭДТА ген. 10 р.д 1800,00р.
РНК вируса гепатита С (РНК HCV), ультрачувствительный метод кровь с ЭДТА кач. 10 р.д 1950,00р.
Гепатит D
РНК HDV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
РНК HDV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 440,00р.
Гепатит E
РНК HEV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 780,00р.
Гепатит G
РНК HGV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 440,00р.
Цитомегаловирус
ДНК Cytomegalovirus соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, АЖ , СМЖ кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Cytomegalovirus кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 410,00р.
ДНК Cytomegalovirus кровь с ЭДТА (плазма) кол 10 р.д. 830,00р.
Вирус простого герпеса
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов соскоб урогенит. тракта, мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 360,00р.
Вирус герпеса VI типа
ДНК Human herpes virus 6 типа мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 320,00р.
ДНК Human herpes virus 6 типа кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 340,00р.
Вирус Эпштейна-Барр
ДНК Epstein-Barr virus мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 370,00р.
ДНК Epstein-Barr virus кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 410,00р.
Вирус Варицелла - Зостер
ДНК Varicella-Zoster virus мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 360,00р.
ДНК Varicella-Zoster virus кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 360,00р.
Папилломавирус
ДНК ВПЧ 16 и 18 типов Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 190,00р.
ДНК ВПЧ 6 и 11 типов Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 190,00р.
Количество ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) кол. 5 р.д. 840,00р.
Количество ДНК ВПЧ 16 и 18 типов Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) кол. 5 р.д. 440,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 320,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 типы) Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) ген. 5 р.д. 710,00р.
ВПЧ-тест расширенный (с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала комп. 3-7 р.д. 1260,00р.
ВПЧ-ПАП-тест (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала (стекло + пробирка) комп. 3-7 р.д. 2840,00р.
ВПЧ-ПАП-тест жидкостный (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса и ПАП-тест) Соскоб из цервикального канала жидкостный комп. 3-7 р.д. 3360,00р.
ВПЧ-тест расширенный жидкостный (с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала жидкостный комп. 3-7 р.д. 1680,00р.
ПАП-тест жидкостный Соскоб из цервикального канала жидкостный   7 р.д. 2540,00р.
Энтеровирус
РНК Enterovirus СМЖ, мазок из ротоглотки кач. 3 р.д. 530,00р.
РНК Enterovirus кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 420,00р.
РНК Enterovirus кал кач. 4 р.д. 530,00р.
Аденовирус
РНК Adenovirus мазок из носа/зева, мазки с конъюнктивы, СМЖ кач. 3 р.д. 530,00р.
Вирусы гриппа А и В , парагриппа 1,2,3,4 типов
Вирус гриппа А и В (РНК Myxovirus influenza) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 420,00р.
Вирус парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 480,00р.
РНК вирусов гриппа А и В, парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Myxovirus influenza, РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 790,00р.
"Вирус гриппа А, А/h2N1/СА/2009, В" (свиной грипп) мазок из носа и зева кач. 2 р.д. 1160,00р.
Парвовирус В19
ДНК Parvovirus B 19 мазок из ротоглотки, слюна, АЖ кач. 3 р.д. 770,00р.
ДНК Parvovirus B 19 кровь с ЭДТА кол. 3 р.д. 420,00р.
ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека)
ДНК HIV кровь с ЭДТА кач. 10 р.д. 1580,00р.
РНК HIV кровь с ЭДТА кол. 10 р.д. 4410,00р.
РНК/ДНК ВИЧ 1 типа, ультрачувствительный метод Очищенные сперматозоиды   10 р.д. 9450,00р.
Вирус краснухи
РНК вируса краснухи (Rubella virus) Кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 730,00р.
РНК вируса краснухи (Rubella virus) Мазок из ротоглотки, амниотическая жидкость (АЖ), спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор) кач. 3 р.д. 800,00р.
Респираторно-синцитиальный вирус
РНК респираторно-синцитиального вируса человека (hRSV) Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ кач. 2 р.д. 1260,00р.
КОМПЛЕКСНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРВИ
Диагностика ОРВИ
РНК hRSv -  Respiratory Syncytial virus (респираторно-синцитиальный вирус человека)
РНК hMpv - Metapneumovirus (метапневмовирус человека)
РНК hСv- Coronavirus (коронавирус человека)
РНК hRv- Rhinovirus  (риновирус человека)
ДНК hAdv - Adenovirus B, C, E (аденовирус человека групп B, C и E)
ДНК hBv - Bocavirus (бокавирус человека)
РНК hPiv - Parainfluenza virus (вирус парагриппа человека 1, 2, 3 и 4 типов)
Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ кач. 2 р.д. 1680,00р.

rammedic.ru

ПЦР анализ что это такое: подготовка, показания, результаты

ПЦР анализ, что это такое знают не многие, хотя сегодня это один из инновационных методов диагностики инфекционных заболеваний, за который его разработчик 1993 году получил Нобелевскую премию. Этот высокотехнологический метод позволяет обнаружить серьезные заболевания на начальной стадии и своевременно начать их лечение.

Суть методики и сфера применения

Анализ основан на принципах молекулярной биологии. Исследование методом ПЦР заключается в использовании особого фермента, что под воздействием температурных режимов, копирует РНК и ДНК присутствующих в собранном биоматериале бактерий и вирусов. Такое массовое размножение дает возможность врачу в точности определить, к какому виду принадлежит бактерия, спровоцировавшая недуг, а также измерить уровень ее концентрации в биоматериале. Проводится процедура копирования в специальном аппарате – амплификаторе, который нагревает и охлаждает пробирки с собранным материалом, создавая удобное условия для репликации.

ПЦР исследование проводят по многим причинам, но чаще всего его используют для определения наличия таких инфекционных болезней как:

  • ВИЧ;
  • герпес;
  • половых инфекции — хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомониаз;
  • кандидоз;
  • гепатит;
  • мононуклеоз;
  • листериоз;
  • цитомегаловирус;
  • туберкулез;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевой энцефалит.

ПЦР анализ не ограничивается сферой применения в медицине, не редко скрининг делают, если необходимо понять, кому принадлежит биологический материал, найденный на месте преступления, то есть ПЦР анализ массово применяют в криминалистике. Требуется отметить, что мазок или кровь на ПЦР берут, если требуется установить отцовство. Результаты ПЦР диагностики ничем не уступают привычному анализу на ДНК родство, да и стоит намного дешевле.

Что показывает при беременности общий анализ крови?34501

Особенности диагностики

Анализ методом ПЦР обладает огромным количеством положительных сторон. В первую очередь, важно отметить чувствительность теста. ПЦР анализатор способен определить молекулы ДНК бактерий даже при их малом количестве, то есть врач получает информацию о ранней стадии заболевания или начале хронической формы недуга. Анализ крови ПЦР способен даже определить наличие инфекционного заболевания, что находится в латентной форме и ничем себя не выдает.

Требуется отметить, что анализ ПЦР у мужчин и у женщин может быть проведен при наличии любого типа материала, это не обязательно должна быть кровь или мазок, подойдет слюна, клетки кожи и даже моча.

Результаты анализов ПЦР могут быть обширными, так как ПЦР диагностика инфекций может отхватить сразу несколько возбудителей заболеваний, что находятся в одном образце биоматериала. Обследование можно пройти в любое удобное время, что показывает анализ человек может узнать за короткий промежуток времени, так как результаты диагностики биоматериала готовы уже через 5 часов.

Все врачи сходятся во мнении, что анализ крови на ПЦР или другого материала никогда не дает ложные результаты, если правильно соблюдена методика проведения диагностики. ПЦР положительный или ПЦР отрицательный может быть ложным, только при условиях, что лабораторные сотрудники не обладают высоким уровнем профессионализма. Если изъятый биоматериал был загрязнен или его неправильно хранили, то расшифровка анализа ПЦР может иметь искаженные результаты.

Подготовка к проведению диагностики

Мазок на ПЦР у женщин из шейки матки берут, если требуется определить заболевания, передающиеся половым путем, к примеру, хламидии, уреаплазымы или герпес. Если ПЦР требуется провести на эти бактерии мужчине, то у него берется выделение из уретры — сок простаты, проще говоря. Кровь методом ПЦР исследуют, если хотят определить гепатит, токсоплазмоз и ВИЧ. Делается анализ ПЦР на мононуклеоз и цитомегаловирус путем изъятия мазка из зева. Полимеразную цепную реакцию на наличие легочных инфекций проводят с наличием такого биоматериала, как мокрота или плевральная жидкость.

ПЦР при беременности делают, если есть подозрение на наличие внутриутробных инфекций, а также болезней и патологий нервной системы плода. В качестве биоматериала для исследования берут у беременной ткани плаценты. Если у человека поражение нервной системы, исследуют спинномозговую жидкость. Для определения такой бактерии как хеликобактер пилори, используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки.

Анализ мочи ПЦР тоже используется нередко, но он менее предпочтителен нежели анализ крови. Он позволяет увидеть наличие патогенных микроорганизмов, что провоцируют инфекционные заболевания, но не может указать точное их количество и степень развития недуга. ПЦР мочи используют, если нет возможности по каким-то причинам изъять кровь или сделать мазок. Также требуется отметить, что ПЦР мочи может проводиться для исследования инфекций у маленьких детей. Анализ мочи позволяет также определить наличие инфекции и воспаления в мочевом пузыре, определить камни, песок, а также цистит и уретрит.

Многие даже не догадываются, что сделать анализ можно с помощью кала, конечно показывает этот тип исследования исключительно наличие паразитов в организме, а также наличие яиц, что остались после выведения взрослой колонии. Анализ кала покажет, сколько именно есть глистов в образце, это позволит определить степень поражения организма. А также врач сможет подобрать препарат, чувствительный к выявленному штамму паразита.

Как уже выше упоминалось, сдать анализ на ПЦР можно при наличии любого биоматериала. ПЦР анализ, что это такое, вам известно, требуется знать еще и подготовку к диагностике. От того, что предстоит изъять, напрямую зависит подготовка, к примеру, сдавать мочу нужно после тщательной гигиены половых органов в утреннее время. Кровь сдают натощак, во время сдачи вернее, накануне, необходимо отказаться от употребления любых медикаментозных препаратов. Если имеются хронические недуги, то список разрешенных препаратов для употребления решается индивидуально, лечащим доктором.

Анализ кала сдают в утреннее время после тщательной подготовки. Накануне сдачи, необходимо отказаться от тяжелой пищи и провести тщательную гигиену половых органов. Анализ кала будет недостоверным, если биоматериал был изъят с помощью клизмы, необходимо естественное нисхождение материала. Подготовка к сдаче слюны не требуется, достаточно оказаться от курения, употребления цитрусового сока.

Перед сдачей биоматериала на определение заболеваний, что передаются при сексе, пациентам требуется исключить половые контакт за два дня до ПЦР диагностики. Женщинам сдавать мазок из шейки матки запрещено во время критических дней через два дня после месячных, иначе ПЦР расшифровка будет иметь искаженные сведения.

Результаты скрининга

Детально объяснить, что такое анализ ПЦР говорит о состоянии того или иного пациента, может исключительно квалифицированный врач, самостоятельно понять данные, указанные в бланке, будет непросто. Если вы попросите доктора-расшифруйте данные, то он в первую очередь скажет, положительный результат или негативный. Если анализ негативный — значит человек здоров, и никаких бактерий в исследуемом материале не обнаружено. В случае с положительным результатом, указывается точный тип возбудителя и его количество, можно узнать также точный период, когда было заражение по наличию определенных иммуноглобулинов.

Какие существуют анализы крови?1909

Существует несколько классов иммуноглобулинов, что могут четко отобразить состояние пациента:

  1. IgG развиваются в крови поле 4 недель заражения и могут сохраняться в крови до нескольких лет. Они не всегда являются показателями бактерий, порой они ступают в качестве памяти организма о том, что когда-то он сталкивался с подобным типом возбудителя.
  2. IgM — появляются в самом начале после заражения. Как правило, они видны уже на 5 сутки, это первые защитники организма, что атакуют бактерию. Они исчезают из результата крови через две недели. Если они присутствуют в анализе крови, то можно предположить, что заражение произошло совсем недавно, примерно неделю назад.
  3. IgA сигнализируют об остром развитии бактериальной инфекции в организме или же об рецидивирующей стадии хронического недуга.

Есть ряд случаев, когда анализ показывает положительный результат, но человек и вовсе не чувствует себя плохо. Это вовсе не говорит об ошибки проведения диагностики, скорей имеет место хроническая форма недуга, которая находится в спящем состоянии или же развитие болезни только начинается. В это время нет достаточного количества бактерий, что могут спровоцировать симптоматику.

Теперь принцип анализа вам известен, и вы сможете обратиться за данной диагностикой, если появится наименьшее подозрение на инфекционное заболевание. От того, насколько быстро вы пройдете диагностику, которая является практически безболезненной, напрямую зависит длительность дальнейшего лечения и его эффективность. Чтобы постоянно поддерживать свое здоровье на хорошем уровне, рекомендовано раз в году проходить профилактическую ПЦР диагностику на наличие ЗПП, а также инфекций других органов. Лучше предупредить заболевание, чем потом бороться с его последствиями.

1diagnos.ru

ПЦР Анализ что это такое: расшифровка

ПЦР-анализ: что это такое? Современная методика, используемая для обнаружения инфекционных недугов в организме, носит название полимеразной цепной реакции (ПЦР).Методом раскрывают скопление некоторых фрагментов ДНК в собранном биоматериале. Он основывается на неоднократном избирательном копировании выбранного участка ДНК за счет ферментов. Полимеразную цепную реакцию в 1983 году создал известный ученый Кэри Муллис.



Сущность анализа на инфекции

ПЦР — это индукционная методика обнаружения различных инфекций. Благодаря ПЦР допустимо распознать микроорганизмов, опираясь на полученные данные генетического биоматериала (ДНК и РНК).

Принцип деятельности полимеразной реакции несложен: взятый биоматериал помещают в микробиологический реактор. В его составе содержатся частицы ДНК микроба. Затем к данному биоматериалу докладывают определенные ферменты, которые соединяются с ДНК микроорганизма и выводят его аналог. Копирование ДНК осуществляется поэтапно: на начальной ступени из 1 молекулы ДНК создаются 2 новые молекулы, на вторичной ступени — из 2 появляется 4 и т. д. По прохождении множественных этапов одну копию ДНК заменяют тысячи аналогов.

Материалом для выполнения исследования на ПЦР могут послужить:

  • эпителиальные соскобы со слизистых оболочек;
  • моча и мокрота;
  • кровь, плазма, сыворотка;
  • биоптаты и др.

За счет эпителиального соскоба можно диагностировать заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП). Для оценки на ЗППП используется мазок или кровь пациента. За счет ПЦР-оценки можно распознать вид инфекции, а также дать ей количественную оценку.

Другими словами, выявить число бактерий в органах человека. Количественный анализ считается наиважнейшим в диагностировании патологических процессов и в оценке результативности терапии инфекций хронического характера.

Правила подготовки к исследованию

Как берут анализ у женщин и мужчин? Изучение методом ПЦР позволяет добиться верного заключения, но тогда следует осуществить требуемую подготовку к нему. Перед сдачей анализа пациенту нельзя заниматься сексом за 24 ч до забора материала (при оценке соскоба, взятого из урогенитального тракта). Кровь нужно сдавать на голодный желудок, до сдачи материала запрещено есть и употреблять жидкость. Мочу сдают в аптечном контейнере, специалистам потребуется порция, собранная с утра. Для выявления вирусного гепатита С и ВИЧ-инфекции на диагностику берут кровь.

У женщин мазок не берут в период менструации. Его следует сдавать перед началом критических дней либо спустя несколько дней после их завершения. Перед сдачей мазка из урогенитального канала мужчины не должны осуществлять опорожнение мочевого пузыря примерно 1,5-2 ч. Перед забором материала на гонорею запрещено мыть наружные половые органы, делать спринцевание.

К тому же за 3-4 ч до взятия материала следует избежать сексуальных контактов и мочеиспускания. Для диагностики недугов половых органов у мужчин и женщин потребуются выделения.

Мочу следует отвезти в медлабораторию через 2-3 ч после ее сбора. Результат анализа  подготовят лишь спустя 1,5-2 дня. Отрицательный результат поясняет, что во взятой биожидкости вредных микроорганизмов не имеется. Положительный итог значит, что человеческий организм инфицирован. Иногда обнаруживается здоровое носительство: указывает на преобладание опасных вирусов, отсутствуют какие-либо симптомы.

Данное состояние не лечится, хотя нужно систематически обследоваться у специалиста. Отметим: распространение инфекции на здоровых людей от переносчиков вероятно. Вдобавок инфекция может перейти в хроническую стадию.

Насколько точна диагностика инфекций

Метод  славится достоверностью, оригинальностью и надежностью. Это значит, что такая оценка может:

  • с наибольшей степенью установить присутствие или дефицит вируса;
  • вывести достоверный вид инфекции;
  • определить бактерии даже при незначительном скоплении ДНК микробов в забранном биоматериале.

В сравнении с иммуноферментным анализом и иными способами диагностирования, ПЦР значительно реже дает ложноотрицательные результаты (заключение выходит отрицательное, когда в организме есть вирусы) и в основном не выносит ложноположительные (исследование указывает на развитие вируса при его отсутствии).

Что выявляет анализ

Оценка методом помогает обнаружить не только проявившиеся вирусы и инфекции у человека, но также скрытые, о которых пациент даже не подозревает.

В связи с этим всем людям, желающим стать в ближайшем времени родителями, рекомендуется выполнить анализ. В ходе исследования могут быть обнаружены разные виды папилломавируса человека, микоплазмы и уреаплазмы (уреалитикум и парвум), гарднереллы и кандиды, микобактерии туберкулеза (в разной форме заболевания), вирусы гепатита, хеликобактерная инфекция, ВИЧ, герпес и цитомегаловирус.

Все вышеуказанные вирусы и инфекции легко выявляются при сдаче анализа ПЦР. К примеру, вирус папилломы может спровоцировать при некоторых ситуациях (как вариант — сильно ослабленная иммунная система) появление на теле бородавок.

Анализ на гепатит С показывает генетический материал вируса. Количественный анализ на гепатит С позволяет выявить сосредоточение вируса в кровяной жидкости. Анализ на туберкулез разных локализаций дает возможность обнаружить активный туберкулез намного быстрее, чем бактериоскопический и бактериологический методы.

Вследствие того, что данный метод оценки является особо чувствительным к происходящим процессам в организме женщин и девушек, множество причин может оказать влияние на конечный итог. Из этого следует, что анализ ПЦР на ВИЧ не считается точным способом диагностирования. Лишь в 96-98% он показывает достоверный результат, а в остальном может указывать на неверную информацию.

Диагностика инфекционных болезней  во многих ситуациях считается легким способом выявления возбудителей на начальных этапах заражения.

Назначить пройти данные обследования может лечащий врач.

По вопросу расшифровки данного анализа следует обратиться к профессионалу. Требуется соблюдать все врачебные советы.

Автор: Е.Кубина

Есть проблемы, запишитесь на прием к врачу.

analizypro.ru

Результаты ПЦР: расшифровка и интерпретация.

Результаты ПЦР и особенности их расшифровки интересуют многих людей, чьим диагнозом является подозрение на ЗППП.

Как отмечают доктора, метод обладает высокой результативностью и минимальным процентом ошибок. Поэтому зачастую используется как контрольный в диагностике инфекционных процессов.

В чем состоит суть ПЦР методики, хотят знать больные люди, и благодаря чему обеспечивается высокая вероятность получения верных результатов. Как расшифровываются полученные итоги, и есть ли связь между этим методом и другими способами диагностики?

Содержание статьи

  • Суть метода ПЦР
  • Какие материалы можно использовать для ПЦР
  • Что значит положительный результат ПЦР
  • Что значит отрицательный результат ПЦР
  • Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР
  • Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения
  • Вид бланка анализов на ПЦР
  • Вероятность ошибочных итогов при ПЦР
  • Связь ПЦР с другими методиками

Суть метода ПЦР

ПЦР-методика – исследование, используемое довольно широко в современном мире. Диагностика позволяет поставить диагноз не только при инфекционных процессах, но и при генетических патологиях, некоторых онкологических недугах. Изначально ПЦР изобреталась не для применения в медицине.

В отрасль здравоохранения метод пришел из области молекулярной биологии, в которой активно использовался после своего открытия. Ученый, создавший ПЦР, получил нобелевскую премию.

Прежде чем разбираться, как расшифровывать результаты анализов ПЦР, необходимо понять, в чем основная суть методики.

На самом деле на словах все выглядит довольно просто. У пациента берется биологический материал. Затем он обрабатывается особым образом с помощью специальных химических реагентов.

Затем получившуюся смесь помещают в особую машину, которая проводит процесс амплификации. То есть многократного умножения определенных фрагментов ДНК или РНК, что удалось выявить с помощью добавления реагентов.

Когда процесс амплификации подойдет к концу, доктору остается только идентифицировать полученные результаты, чтобы поставить верный диагноз.

Главное – проявить внимательность на этапе идентификации. Но учитывая, что сегодня большую часть работы делает компьютер, все сильно упрощается.

ПЦР отличается высокой эффективностью. Ее широко применяют для того, чтобы определять наличие в организме скрытых инфекционных процессов, которые не дают положительных серологических реакций. Также скрытые инфекции обычно нельзя выявить с помощью посева или микроскопии. Поэтому зачастую ПЦР – единственный достоверный способ постановки диагноза в этом случае.

Какие материалы можно использовать для ПЦР

Часто удачность исследования зависит от того, как и какой материал брался для выполнения анализа. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Гораздо большее значение имеет подготовка к обследованию с помощью метода.

В качестве материала могут служить:

  • кровь, сдаваемая в соответствии со стандартными рекомендациями из вены на локтевом сгибе
  • мокрота, собираемая при откашливании
  • налет с ротовой полости, собираемый доктором в утреннее время, пока пациент еще не завтракал и не чистил зубы
  • мазок с половых органов, дающий хорошие результаты в том случае, если больной не мочился в течение нескольких часов, отказывался от сексуальных контактов несколько дней и соблюдал ряд других рекомендаций
  • исследование мочи, при котором биоматериал также предпочтительно собирать с утра, не проводя накануне гигиену половых органов
  • биоптаты органов или тканей, получаемые с помощью специальных инструментов и др.

Как отмечают врачи, материалом для ПЦР может быть совершенно любая жидкая среда организма человека.

При выборе главное помнить о том, что предпочтение отдают той среде, где с большей долей вероятности будет присутствовать возбудитель. Например, при половых инфекциях целесообразнее брать мазок с половых органов или кровь, чем мазок из ротовой полости.

Решать вопрос о том, какие материалы используются для получения результатов ПЦР в том или ином случае, лучше всего с лечащим врачом на приеме. Доктор сделает оптимальный выбор, исходя из предполагаемого у пациента заболевания.

Что значит положительный результат ПЦР

ПЦР – метод, который может похвастаться своей высокой специфичностью.

Предположим, доктор поставил себе цель обнаружить какой-то патогенный микроорганизм в теле пациента. И если тот на самом деле присутствует в теле, он будет обнаружен. При этом спутать его с каким-либо другим патогеном благодаря уникальному коду ДНК будет невозможно.

Если ПЦР положительный, значит, в организме с вероятностью почти в 100% находится возбудитель, поиск которого проводился врачом. Ведь методика рассчитана, в отличие от многих других диагностических методов, именно на поиск самих возбудителей, а не их следов.

Как отмечают доктора, при данном исследовании вероятность случайно принять один возбудитель за другой сводится к нулю. Зато существует вероятность получения положительных результатов после терапии.

Если в организме будут оставаться обломки нуклеиновых кислот. Однозначно положительной реакция чаще всего бывает, если пациент предъявляет жалобы на какие-то конкретные симптомы инфекционного процесса. Причем результат будет сохраняться даже в течение нескольких месяцев после того, как возбудитель будет полностью побежден и удален из организма.

Что значит отрицательный результат ПЦР

Если ПЦР результат отрицательный, значительное число пациентов автоматически считают, что они здоровы. Это практически правильное решение.

Ведь если итоги оказались отрицательными, значит фрагменты патогенного микроорганизма не были определены тест-системой. Из этого следует логичный вывод, что микроорганизма в теле нет.

Однако стоит учитывать, что несмотря на всю свою высокую чувствительность и специфичность, методика имеет определенный порог чувствительности. Если концентрация возбудителя на момент обследования не переходит границу этого порога, результат будет расцениваться, как отрицательные. Хотя на самом деле окажется ложным до поры до времени.

Доктора акцентируют особое внимание на том, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие патологии. Чтобы на 100% быть уверенным в своем здоровье, пройти исследование повторно рекомендуется через несколько недель, а порой и месяцев.

Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР

Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какой врач будет проводить расшифровку ПЦР исследования.

В первую очередь необходимо запомнить, что доверять результаты стоит тому же медицинскому работнику, что первоначально давал направление на исследование. Связана эта рекомендация с тем, что в этом случае доктор будет представлять себе, что он ожидает увидеть в анализах. Сможет грамотно интерпретировать итоги, соотнося их с клинической картиной.

Получить направление наиболее часто можно от уролога, гинеколога или венеролога. Соответственно, после получения итогов относить бланк с результатами стоит кому-то из них. Важно помнить, что ПЦР – довольно дорогой метод диагностики. Его не принято использовать просто так, без специальных показаний к обследованию.

Среди них:

  • появление специфических для ЗППП симптомов
  • обследование перед планированием беременности или процедурой искусственного оплодотворения
  • поиск причин бесплодия и другие показания

Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения

Часто пациенты задают на приеме у медицинского работника вопрос о том, когда результаты ПЦР крови и мазков становятся положительными после заражения. Все зависит от того, насколько быстро конкретная инфекция сможет, размножаясь, пройти пороговую для теста концентрацию в материале.

Преимуществом ПЦР является то, что порог чувствительности у теста довольно низкий. Это значит, что выявить признаки заражения можно даже в том случае, если количество возбудителя в биологическом материале будет минимальным.

Подобная особенность дает возможность постановки диагноза даже в период инкубации, когда симптомы еще полностью отсутствуют.

Однако осечка возможна и при применении ПЦР методики. Это происходит, например, если пороговая концентрация все же не успела достичь определяемых тестом значений. В этом случае велика вероятность получения далеких от правды результатов.

Вид бланка анализов на ПЦР

Вопрос о том, как выглядит бланк результатов анализов ПЦР, весьма актуален.

Как отмечают доктора, ничего сложного во внешнем виде бумаги нет. Зачастую на документе можно обнаружить название искомого возбудителя. А напротив него пометку «обнаружен» или «не обнаружен».

В первом случае пациенту рекомендуется озаботиться собственным здоровьем. Так как анализ расценивается как положительный, а человек, как зараженный. Следовательно, ему требуется терапия.

Во втором случае чаще всего состояние пациента оценивают, как здоровое, хотя могут быть и исключения. Важно помнить, что количество возбудителей, указанных на бланке, зависит во многом от того, какое конкретно вид анализа применялся.

Если проводился поиск только одного патогенного микроорганизма, в результате будет фигурировать только его название с соответствующей пометкой. Если ПЦР проводилось сразу на несколько инфекций, что тоже возможно, в бланке будет список патологий с пометками.

Сегодня в лабораториях при комплексном анализе на группу инфекций не принято выдавать на каждый патогенный микроорганизм отдельный бланк. Их все указывают на одном листе.

Вероятность ошибочных итогов при ПЦР

Часто пациенты интересуются вопросом о том, возможно ли получение ложных результатов обследования при использовании методики. К сожалению, как отмечают врачи, ошибки хоть и редко, но случаются.

Существует, например, вероятность получить ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Объясняется это очень просто.

Терапия уже окончена, возбудитель удален из организма и не может заражать новые ткани. Однако остатки ДНК или РНК еще могут циркулировать в крови или ином диагностическом материале. В этом случае тест-система будет улавливать их и воспринимать за полноценную патологию, выдавая ложноположительный итог.

Именно поэтому рекомендуется после терапии сдавать исследование несколько раз с разными промежутками времени. Только в этом случае итоги будут достаточно объективными.

Ложноотрицательные результаты анализов ПЦР после приема антибиотиков также возможны. Происходит это в том случае, если пациент, неверно используя препараты антибактериального ряда, смазал симптомы болезни.

Не позволил микроорганизму активно размножаться в теле, но при этом и не довел его уничтожение до конца. В этом случае количество возбудителей может упасть ниже пороговой концентрации чувствительности. Это и даст неверные результаты тестирования.

Связь ПЦР с другими методиками

С помощью метода ПЦР доктора нередко подтверждают или, напротив, опровергают результаты других методов обследования, используемых для диагностики ИППП.

Например, с этой целью может использоваться ИФА.

Бывает так, что ПЦР отрицательный, а ИФА положительный. Тогда больной оказывается в замешательстве относительно своего состояния.

Доктора рекомендуют не теряться, а сначала провести оба теста повторно. Если ИФА останется положительным, а ПЦР отрицательным, с большой вероятностью заболевание в организме пациента отсутствует.

Ведь иммуноферментный анализ направлен на реакцию антиген-антитело. И порой может принимать сходные по структуре антигены других возбудителей за искомый, выдавая ложноположительные результаты.

Вероятность того, что ИФА дало верный результате на второй раз, а ПЦР, напротив, выдало ошибку, например, из-за низкого титра возбудителя, сведена к минимуму. Это скорее казуистика, чем реальная клиническая практика.

Результаты ПЦР диагностики обладают высокой ценностью в диагностике большого количества различных патологий. В первую очередь методика является незаменимой при подозрении на различные ЗППП.

Если вам нужно сдать получить комментарии по результатам ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

onvenerolog.ru

что это такое, типы, как сдавать, расшифровка

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

Написано статей

60


Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Содержание статьи:

Общие сведения

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

  • наличие ВПЧ;
  • штаммы, которыми инфицирован больной;
  • количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом.  ВПЧ распространяется следующими путями:

  • при незащищенных половых контактах;
  • при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
  • контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
  • во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

  1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
  2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
  3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
  4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

  • собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
  • нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
  • реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

  • Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
  • Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
  • Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Статьи по теме:

Поделиться в соцсетях:

papillomus.ru


Смотрите также

Регистрация на сайте

Пароль будет отправлен тебе на e-mail.

 

×